【摘 要】
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目的:甲状腺癌（TC）是人体最常见的内分泌肿瘤,其发病率逐年上升,尤其在女性中,给患者的生活带来了沉重的负担,因此,明确其病因病机具有十分重要的意义。离子通道转运体是近年来肿瘤研究中的热点,碳酸氢盐转运体SLC26A9（solute carrier family 26 member 9）是其中一员。SLC26A9 属于 SLC26A家族,其主要功能是参与碳酸氢盐及氯离子的转运,既往研究证实它能够参
【基金项目】
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国家自然科学基金（基金课题编号:81660098;基金编号:82160505）； 遵义市“15851人才工程”项目资助（2018）； 遵义医科大学附属医院博士科研启动基金（项目编号:院字[2017]18号）；
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目的:甲状腺癌（TC）是人体最常见的内分泌肿瘤,其发病率逐年上升,尤其在女性中,给患者的生活带来了沉重的负担,因此,明确其病因病机具有十分重要的意义。离子通道转运体是近年来肿瘤研究中的热点,碳酸氢盐转运体SLC26A9（solute carrier family 26 member 9）是其中一员。SLC26A9 属于 SLC26A家族,其主要功能是参与碳酸氢盐及氯离子的转运,既往研究证实它能够参与胃癌、结直肠癌、乳腺癌的发生发展。然而,SLC26A9在甲状腺癌中的功能作用尚不明确,因此,本课题的主要目的是阐明SLC26A9在甲状腺癌发生发展中的功能作用,并初步探讨其分子机制,以期为甲状腺癌的诊断治疗提供新的潜在的靶点。方法:1.利用免疫组织化学染色（IHC）检测SLC26A9在甲状腺癌组织及正常甲状腺组织中的表达差异,并分析其与临床病理学特征之间的联系;2.利用免疫印迹技术（WB）检测不同甲状腺癌细胞系与正常甲状腺上皮细胞中SLC26A9的表达差异;3.利用慢病毒在TPC-1细胞株中过表达SLC26A9,构建过表达TPC-1甲状腺癌细胞稳转株;在KTC-1细胞株中沉默SLC26A9,构建沉默KTC-1甲状腺癌细胞稳转株;利用WB及实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）技术验证过表达/沉默稳转株是否构建成功;4.利用CCK8及Ki67染色检测沉默/过表达SLC26A9后甲状腺癌细胞增殖能力的变化;5.利用细胞划痕实验、Transwell实验观察沉默/过表达SLC26A9后甲状腺癌细胞迁移、侵袭能力的改变;6.利用流式细胞学技术检测沉默/过表达SLC26A9后甲状腺癌细胞凋亡及细胞周期的变化;7.利用WB检测过表达/沉默SLC26A9稳转株细胞与对照组细胞内增殖、迁移、侵袭、凋亡、细胞周期相关蛋白的表达差异,并进一步探索SLC26A9对EGFR/MEK/ERK信号通路的影响。8.利用免疫荧光染色检测SLC26A9与EGFR在细胞内的定位情况,并利用免疫共沉淀技术验证SLC26A9与EGFR是否存在相互结合;9.裸鼠移植瘤模型构建,在体情况下观察SLC26A9对甲状腺癌发生发展的影响。结果:IHC结果显示 SLC26A9在甲状腺癌组织中的表达明显高于正常甲状腺组织。临床病理学特征相关性分析提示SLC26A9的表达与甲状腺癌患者的性别之间存在关联,在女性患者中的表达高于男性患者。五株甲状腺癌细胞系（BCPAP、TPC-1、KTC-1、FTC133、8305C）中SLC26A9的表达大部分明显高于正常甲状腺上皮细胞株（Nthyori-3-1）,其中乳头状癌中KTC-1细胞系SLC26A9表达最高,TPC-1细胞系SLC26A9表达最低。在KTC-1细胞中沉默SLC26A9能够明显抑制甲状腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,阻滞细胞周期于G0/G1期并促进细胞凋亡。在TPC-1细胞中过表达SLC26A9能够明显促进甲状腺癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力,促进细胞周期GO/G1期向S期、G2期转化,并抑制细胞凋亡。体内实验提示沉默SLC26A9能够明显抑制移植瘤的生长,而过表达SLC26A9则能够促进移植瘤的生长。分子机制研究提示:SLC26A9能够通过调控EGFR/RAS/RAF/MEK/ERK信号通路引起下游分子的改变,包括:细胞周期蛋白 CyclinD1、CyclinE2;凋亡相关蛋白 Caspase3、Caspase8、Caspase9、Bc12、Bax。除此之外,SLC26A9也能够引起上皮间质转化（Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT）相关蛋白改变,包括 E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail。结论:SLC26A9通过调控EGFR/Ras/Raf/MEK/ERK信号通路,促进了甲状腺癌的发展,SLC26A9在甲状腺癌的进展中具有十分重要的意义。
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