论文部分内容阅读
本实验对日本北海道和种马、对洲马、宫古马、英国纯血马、阿拉伯马、布雷顿马、克里奥尔马、佩尔什马共9个品种马外周血单核细胞MxA蛋白cDNA进行了分析。从马外周血中提取RNA后,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,获得MxA cDNA,克隆到pGEM?-T Easy载体上。通过分析重组子的DNA序列,对其核苷酸序列的多态性进行分析。结果发现,马MxA cDNA全序列(2122bp)中的3个位点碱基发生有义突变,即977位点由G→A、1234位点T→A和1790位点由G→C。据推测,此3个位点的碱基替换分别引起其编码的MxA 蛋白第298位点由精氨酸(Arg )改变成赖氨酸(Lys) 、377氨基酸由缬氨酸(Val)改变成谷氨酸(Glu)、 562氨基酸由色氨酸(Trp)改变成半胱氨酸(Cys),并且发现该3个突变位点中977位点由G→A和1234位点T→A 均出现于所测9个马MxA cDNA序列中,未发现品种差异,只有1790位点由G→C,说明只是不同个体间产生差异。因此采用错配引物扩增限制性片断长度多态性方法(mismatch primer restriction fragment length polymorphism),来检测MxA 基因12外显子3’端(cDNA第1790)位点的多态性,其结果表明该位点变异,是因个体不同而异,有G/G、C/C和C/G 型,多个个体为C/G型,而未发现品种特征。