论文部分内容阅读
目的:本研究以社区人群肠道定植的大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)为研究对象,通过观察该菌对喹诺酮类药物的耐药性和检测其携带的质粒介导的喹诺酮类耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)基因,分析喹诺酮类耐药基因在社区人群中的流行情况,从而为临床有效的预防和治疗提供科学的依据和指导,使解决耐药问题成为可能。方法:1.菌株收集:2013年7月~10月期间,于福建医科大学附属协和医院健康体检中心收集429份健康体检者粪便标本,用含2ug/ml左氧氟沙星的伊红美蓝平板筛选对左氧氟沙星非敏感的大肠埃希菌。2.喹诺酮类耐药耐药基因的检测:聚合酶链反应(PCR)扩增PMQR基因(包括qnr A、qnr B、qnr S、qnr C、qnr D、aac(6’)-Ib-cr、qep A、oqx AB)。3.PMQR阳性菌株的药敏试验和β-内酰胺酶基因检测:采用琼脂稀释法检测喹诺酮类耐药基因阳性E.coli的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC);PCR扩增常见β-内酰胺酶类耐药基因。4.PMQR阳性菌株的同源性分析:采用肠杆菌基因间保守重复序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus,ERIC)为引物扩增PMQR基因阳性E.coli;采用PCR法分析PMQR基因阳性E.coli系统发育分型。5.qnr S基因阳性E.coli的分子流行病学特征分析:采用琼脂稀释法检测实验菌株的对9种常见抗生素的MIC值;采用ERIC-PCR了解其同源性;采用PCR法对其进行系统发育分型的分析;PCR扩增多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST),用e BURST V3软件分析菌株的同源性并作图;采用接合试验以探索qnr S基因是否具有可转移性。结果:1.菌株收集:429例健康人标本中共分离出382株对左氧氟沙星不敏感的E.coli,其中每人只收集1株E.coli。2.喹诺酮类耐药基因的检测结果:PMQR阳性E.coli占34.1%(120/382),其中qnr阳性E.coli 50株,aac(6’)-Ib-cr阳性E.coli 44株、oqx AB阳性E.coli 43株。3.PMQR阳性菌株的药敏试验和β-内酰胺酶基因检测结果:120株PMQR阳性E.coli中,对萘啶酸的耐药率高达100%,对环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为78.3%和66.7%。9种抗生素中,阿米卡星和亚胺培南的抗菌活性相对较高,其敏感率分别为97.5%和99.2%。庆大霉素耐药率为45.8%,头孢噻肟为43.30%及头孢吡肟为6.7%;共检出99株携带常见β-内酰胺类耐药基因。4.PMQR阳性菌株的同源性分析结果:ERIC-PCR分析结果显示120株可分为71个不同的型别,其中3株未能分型;系统发育分型结果显示:A型最多,占58.3%(70/120),其次为B1型占25%(30/120),D型占14.2%(17/120),B2型占2.5%(3/120)。5.qnr S基因阳性E.coli的分子流行病学特征分析:47株携带qnr S基因的E.coli均对奈啶酸和四环素耐药率均为100%,对阿米卡星和亚胺培南敏感率均为100%;9株携带其他PMQR基因,33株携带常见ESBLs基因;系统发育分型结果为A型占66.0%(31/47),B1型占25.5%(12/47)及D型占8.5%(4/47);依据ERIC-PCR结果分析可将qnr S基因阳性E.coli分为40个不同的型别;MLST结果显示ST10,ST4428为主要的ST型别;qnr S基因的接合成功率为23.4%(11/47)。结论:分离自健康人群E.coli的PMQR基因阳性率较高,且大多同时携带ESBLs基因;qnr S型基因在社区人群肠道细菌中检出率最高,且具有非克隆传播、可转移性的特点。健康人群携带的耐药细菌是一个非常重要的耐药基因库。这是国内首次针对健康人群粪便中的E.coli进行PMQR基因检测。