甲真菌病(onychomycosis),旧称甲癣(tinea unguium)是由致病性真菌感染指、趾甲引起的一种慢性、感染性、传染性皮肤病,是皮肤科常见病、多发病,又是顽固、易复发的难治病。占浅部真菌感染的30%及所有甲病的50%。在普通人群中的发病率为2%~15%,目前主要依靠临床特征、直接镜检和真菌培养诊断。但KOH法直接镜检阳性率仅为50%~75%,且易受标本数量和质量、检验者的经验技术等因素的影响;真菌培养约有30%的假阴性,阳性率波动于25%~80%之间,且需要4周方可确定菌种,镜检和培养相结合的正确诊断率约为50%~75%,上述问题限制了甲真菌病的快速诊断和治疗。随着新一代内用抗真菌药物广泛应用于临床,这些药物各有特定的抗菌谱,且较昂贵和有明显的副作用,但传统的真菌病诊断方法不能解决快速选药的问题,因此有必要建立一种快速高效且敏感的确诊甲真菌病的方法,以利指导临床用药。近年来分子生物学技术已渗透至科学研究的各个领域,如随机引物PCR(AP-PCR),mtRNA的限制性酶切分析(RFLP),探针与DNA印迹杂交等,其中PCR技术因具有简便、省时、敏感性高、特异性好等优点,已经成功的应用于医用真菌学的分类鉴定、基因分析等研究,但很少用于临床病原真菌的检测与诊断技术,主要是因为临床标本中致病真菌量少,真菌DNA提取困难,限制了它的应用。本实验旨在寻求一种快速高效提取组织中病原真菌DNA的方法,以及一种适用的快速诊断甲真菌病的方法,更好的服务于临床。目的:1.探讨一种快速高效提取甲组织中致病真菌DNA的方法;2.采用AP-PCR法快速诊断甲真菌病。