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背景:近年来,随着电子光学照明设备及光学诊疗设备和显微镜的广泛应用,视网膜光损伤(light-induced retinal damage,LIRD)已成为造成人类视力下降的重要原因之一。如果外界光照导致视网膜受到过强或过长时间的刺激时,就可能造成难以恢复的视力损害甚至永久性的失明。关于视网膜光损伤的发病机制及治疗方法的研究目前并不非常清楚。最新研究结果表明,免疫反应可能参与了视网膜光损伤的过程。因此,深入研究视网膜光损伤的发病机制有助于针对性的寻求治疗疾病的有效的药物和方法。芬戈莫德(Fingolimod,FTY720)是提取于冬虫夏草中具有免疫抑制作用的药物成分,现已用于多发性硬化症和器官排斥反应的治疗。FTY720可有效阻滞淋巴细胞流出和促进成熟淋巴细胞流入次级淋巴器官,减少外周血及组织液的免疫细胞循环,避免潜在的组织损伤。目的:根据视网膜光损伤和FTY720的研究报道,本实验目的有四点:1.建立光损伤视网膜大鼠模型;2.研究视网膜光损伤过程中免疫细胞及分子对视网膜的浸润情况,如:CD3~+、CD4~+、CD8~+T细胞;3.研究FTY720对光损伤大鼠的视网膜的组织结构和视功能的保护作用;4.如果免疫反应参与了视网膜光损伤的过程,进一步研究FTY720是否可以通过免疫抑制效应来阻滞免疫细胞浸润和损伤视网膜。材料及方法:将Sprague-Dawle(SD)大鼠分成非光损伤组、光损伤组、FTY720组和溶剂组。所有大鼠出生起即在微弱循环光的条件下饲养;光损伤组大鼠在2700Lux条件下光照6h;FTY720组在光照前注射10ml/kg剂量的FTY720。于光照后1、3、5、7天,运用免疫组化法检测视网膜CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T细胞,蛋白免疫印迹法检测视网膜CD3~+、CD4~+、CD8~+蛋白表达,TUNEL染色法检测视网膜外核层凋亡细胞。光照后第7天,运用闪光视网膜电图(flash-electroretinogram,F-ERG)记录各组的a波、b波、Ops波的振幅及波形,常规HE切片观察视网膜结构形态,计数统计视网膜外核层的细胞层数。结果:1.光损伤后,视网膜组织结构受损严重,视网膜外核层细胞层数明显变少(P<0.001)。F-ERG的a波、b波和Ops波的波形平坦,振幅下降明显(P<0.001)。2.免疫细胞参与光损伤视网膜的过程。光损伤后,视网膜CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T细胞增多,CD3~+、CD4~+免疫蛋白的表达增强;外核层出现凋亡细胞。3.FTY720对光损伤大鼠视网膜的组织结构和视功能具有保护作用。FTY720组的视网膜组织结构较为完整,外核层细胞层数和数量显著多于光损伤组(P<0.001);F-ERG的a波、b波和Ops波的振幅明显提高(P<0.001)。4.FTY720组视网膜未见CD3~+CD4~+和CD3~+CD8~+T细胞,CD3~+、CD8~+蛋白表达低于光损伤组,未见外核层出现细胞凋亡。结论:1.光刺激可激活视网膜局部免疫反应,引起CD3~+、CD4~+和CD8~+T细胞对视网膜的浸润和损伤,造成感光细胞的凋亡和减少,最终导致视网膜结构和功能受损。2.FTY720对光损伤视网膜具有极强的保护作用,可有效防止强光对视网膜组织结构和视功能的损伤。3.FTY720可以阻滞免疫细胞损伤视网膜,减少感光细胞的凋亡和丢失,保存视网膜组织结构的完整性和视功能。该研究有助于拓展我们对视网膜光损伤的发病机制,FTY720的保护作用和机制的认识,对未来探究视网膜光损伤的治疗方法和FTY720在各类疾病的潜在应用提供理论依据和新的思路。