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本文主要从以下几方面进行论述： 第一部分 SAV1在胰腺癌组织和细胞中的表达及其临床意义 目的：本部分主要研究SAV1在胰腺癌细胞株、胰腺癌组织和癌旁组织中mRNA及蛋白的表达水平；分析胰腺癌组织中SAV1表达和临床病理因素之间的相关性，进一步分析SAV1与胰腺癌患者预后之间的关系。 方法：在南京医科大学附属上海第一人民医院获取12例胰腺癌组织及配对的癌旁正常胰腺组织。同时利用胰腺癌组织芯片，分析SAV1与胰腺癌患者预后之间的相关性。 1、SAV1的mRNA及蛋白在胰腺癌细胞株及人胰腺导管上皮细胞中的表达检测：利用qRT-PCR及Western blot检测胰腺癌细胞株PANC-1、ASPC-1、CFPAC-1、SW1990及人胰腺导管上皮细胞HPDE中SAV1表达的差异。 2、SAV1的mRNA及蛋白在胰腺癌及癌旁组织中的表达检测：获取胰腺癌新鲜冰冻标本，利用qRT-PCR及Western blot检测SAV1的mRNA及蛋白表达水平。 3、胰腺癌中SAV1表达水平和患者临床病理因素之间的相关性分析：采用胰腺癌组织芯片，运用免疫组化检测SAV1表达水平，采用χ2检验分析胰腺癌组织中及癌旁组织中SAV1的表达差异，并进一步分析胰腺腺癌组织中SAV1与患者临床病理因素之间的相关性。 4、胰腺癌组织中SAV1的表达和患者预后之间的相关性：采用Kaplan-Meier分析绘制生存曲线，分析SAV1表达水平和胰腺癌患者生存期之间的关系。 结果：1、SAV1在4株胰腺癌细胞（PANC-1、ASPC-1、CFPAC-1、SW1990）中低表达，在人胰腺导管上皮细胞HPDE中高表达。 2、胰腺癌中SAV1的mRNA及蛋白在癌旁组织中高表达，癌组织中低表达。 3、在胰腺癌病理组织芯片中，我们发现SAV1主要在细胞质中表达，83例胰腺癌癌旁组织中有58例在细胞质中高表达，和癌组织中SAV1表达有明显差异（P＜0.05)；并且细胞质SAV1的表达和胰腺癌的分化程度、淋巴结转移有关，而和性别、年龄、肿瘤大小、T、M、TNM、肿瘤位置及神经侵润无明显相关性。 4、SAV1表达水平与总生存率成正相关。 结论：1、胰腺癌肿瘤细胞及组织中SAV1低表达，正常人胰腺导管上皮细胞及癌旁组织高表达；并且细胞质SAV1的表达和胰腺癌的分化程度、淋巴结转移有关。 2、胰腺癌中细胞质SAV1表达可以作为胰腺癌预后的一个指标。并且有望成为胰腺腺癌治疗的一个新型潜在靶点。 第二部分 SAV1的表达对人胰腺癌细胞侵袭、迁移功能及对EMT的影响 目的：通过研究SAV1沉默或过表达以后，人胰腺癌细胞株恶性表型发生的变化，包括肿瘤细胞的迁移、侵袭、凋亡及对EMT的影响。 方法：在第一部分，四株人胰腺癌细胞PANC-1、ASPC-1、CFPAC-1、SW1990，SAV1在PANC-1中表达较高，在ASPC-1中表达较低，我们采用SAV1siRNA转染人胰腺癌细胞株PANC-1，下调SAV1表达；慢病毒pLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro-CMV-SAV1-3Flag转染人胰腺癌AsPC-1细胞。然后利用细胞划痕试验和Transwell法检测SAV1沉默及过表达后对人胰腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响；利用流式细胞术检测SAV1沉默及过表达后对人胰腺癌细胞凋亡的影响；最后qRT-PCR和Western blot法检测SAV1沉默及过表达后EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达变化。 结果：细胞划痕试验和Transwell实验发现SAV1siRNA处理组细胞迁移、侵袭能力显著增强，流式细胞术发现沉默SAV1可抑制胰腺癌细胞凋亡；而过表达SAV1后，细胞迁移、侵袭能力显著减弱；流式细胞术发现过表达SAV1可促进胰腺癌细胞凋亡。Western blot结果显示：下调SAV1后EMT标志蛋白Vimentin表达升高，E-cadherin表达下降；而过表达SAV1后Vimentin表达下降，E-cadherin表达升高；qRT-PCR结果与其一致。 结论：下调SAV1表达增强其侵袭能力，抑制肿瘤细胞凋亡并可促进人胰腺癌细胞的EMT；而上调SAV1则减弱其侵袭能力，促进肿瘤细胞凋亡并可逆转人胰腺癌细胞的EMT。 第三部分 5-Aza-CdR对胰腺癌细胞株凋亡的影响及其SAV1表达的影响 目的：SAV1在胰腺癌中发挥生物学作用的上游调控基因仍不明确，本部分试图研究甲基化对SAV1表达的影响，并探讨甲基化抑制剂5-氮杂-2脱氧胞苷（5aza-CdR）对人胰腺癌细胞增殖、克隆形成及凋亡的影响。 方法：利用生物信息学方法检测SAV1的启动子区，发现在SAV1的启动子区存在CpG岛；然后利用甲基化抑制剂5-氮杂-2脱氧胞苷（5-aza-2-deoxycytidine，5aza-CdR）处理胰腺癌AsPC-1细胞，利用qRT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光手段检测SAV1的表达变化；CCK8实验及细胞克隆形成实验检测甲基化抑制剂5aza-CdR处理人胰腺癌AsPC-1细胞后，细胞增殖与克隆形成情况；流式细胞仪检测5aza-CdR处理的人胰腺癌AsPC-1细胞后，细胞凋亡的变化。 结果：生物信息学检测SAV1启动子区存在CpG岛；Western blot结果显示：与对照组相比，5-Aza-CdR作用第4天与第5天后，SAV1mRNA的表达量显著增加（P＜0.05），qRT-PCR及细胞免疫荧光结果与其一致；AsPC-1细胞在5aza-CdR（5uM、10uM、30uM）浓度下的克隆形成率分别降低了52%、75%、84%（P＜0.001）。流式细胞仪测结果发现对照组中总凋亡率为1.9%，5-Aza-CdR处理后凋亡为5%。 结论：SAV1在胰腺癌AsPC-1细胞中的表达受到甲基化调控；甲基化抑制剂5-Aza-CdR能有效逆转体外培养的AsPC-1细胞中SAV1基因的异常甲基化，诱导SAV1表达；甲基化抑制剂5aza-CdR抑制胰腺癌AsPC-1细胞克隆能力，抑制肿瘤胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡。