本研究目的: 第一章建立一种从小鼠骨髓中分离培养间充质干细胞（MSCs）的高效方法，并在体外进行传代扩增和鉴定。 第二章观察小鼠骨髓间充质干细胞对去除CD4+CD25+Treg哮喘小鼠气道炎症的影响，探讨MSCs上调CD4+CD25+调节性T细胞（Treg）在改善哮喘小鼠气道炎症中的作用。 试验方法: 1、小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定 1．1体外分离、培养小鼠骨髓来源的MSCs 健康3～4周龄SPF级BALB/c小鼠，脱颈处死，75％酒精浸泡15min无菌取出股骨和胫骨，以DMEM/F12培养基冲出骨髓，完全培养基重悬，接种致25c㎡塑料培养瓶，置于37℃、5％ CO2、饱和湿度培养箱中培养。6天后首次换液去除未贴壁细胞，以后每天换液，细胞达90％融合时传代。 1．2小鼠骨髓MSCs的鉴定 第5代MSCs接近融合时进行成骨和脂肪细胞诱导分化。 2、间充质干细胞对去除CD4+CD25+调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响 2．1哮喘模型的制备 将健康六周龄SPF级雌性BALB/c小鼠40只，随机分为5组，每组8只，分别为正常对照组（A组），哮喘模型组（B组），去除Treg细胞哮喘模型组（C组），MSCs处理组（D组），去除Treg细胞MSCs处理组（E组），B组、C组、D组和E组以500μg/ml卵白蛋白（OVA）溶液0．2ml腹腔注射致敏，以5％OVA溶液雾化吸入激发建立小鼠哮喘模型，A组以生理盐水代替OVA。 2．2小鼠体内去除Treg细胞模型的制备 C组和E组小鼠在激发前1天尾静脉注射0．25mg大鼠抗小鼠CD25+单克隆抗体，并在激发试验第三天强化注射0．25mg大鼠抗小鼠CD25+单克隆抗体，维持Treg细胞低水平。 2．3 MSCs处理组 D组与E组在诱导哮喘的第14天、20天尾静脉分别注入0．2ml浓度调整为15×106/ml的MSCs，其余三组经尾静脉注入等量PBS。 2．4试验项目 流式细胞术检测外周血CD4+CD25+Treg占淋巴细胞的比例，检测小鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数、嗜酸性粒细胞、淋巴细胞、中性粒细胞计数，结合病理切片分析气道炎症情况。 统计学方法： 实验数据采用SPSS13．0软件进行统计分析，病理评分采用中位数表示，组间比较采用秩和检验。其余各组数据以均数土标准差表示。组间样本均数比较采用单因素方差分析（One—Way ANOVA），方差分析先行方差齐性检验，方差不齐进行平方根转换，用LSD—t法进行两两比较。P<0．05差异有统计学意义，P<0．01即差异有显著统计学意义。 结论: 1．贴壁筛选法分离小鼠骨髓MSCs效率和纯度高，稳定性好。分离培养的细胞其形态、多向分化潜能符合MSCs的特征。成功分离、培养、扩增小鼠骨髓MSCs为进一步动物实验奠定了基础。 2．和未去除外周血CD4+CD25+Treg的哮喘小鼠相比，哮喘小鼠去除外周血CD4+CD25+Treg其气道炎症显著加重，静脉输注MSCs能上调哮喘小鼠外周血CD4+CD25+Treg比例，对哮喘小鼠气道炎症具有显著的抑制作用。去除外周血CD4+CD25+Treg的哮喘小鼠静脉输注MSCs，其气道炎症仍呈现明显抑制作用，与未去除外周血CD4+CD25+Treg哮喘小鼠相比，MSCs对去除外周血CD4+CD25+Treg哮喘小鼠气道炎症的抑制作用有所减弱，但与未去除外周血CD4+CD25+Treg哮喘小鼠相比并无显著性差异。结果进一步表明外周血CD4+CD25+Treg比例下降参与了哮喘小鼠气道炎症的形成，MSCs上调外周血CD4+CD25+Treg比例仅仅是其抑制哮喘小鼠气道炎症的机制之一，MSCs对哮喘小鼠气道炎症的影响还存在其他重要机制。