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目的:妊娠期高血压疾病（hypertensive disorder complicating pregnancy,HDCP）是危及母儿生命安全的妊娠期特有疾病,其基本的病理生理变化为全身小血管痉挛。大电导钙激活钾通道（large conductance calcium-activated potassium channel,BKca）是调节血管舒缩作用中最关键的一种离子通道。BKca通道由形成孔道的α亚基和具有调节功能的β亚基组成,β亚基有β1-β4四类亚型,其中β1主要在平滑肌组织中表达,尤其是血管平滑肌。本实验先用HE染色确定取材为符合实验要求的子宫小动脉,然后运用实时荧光定量PCR（Real-time fluorescent quantitative PCR experiment,QPCR）和Western blotting技术检测妊娠期高血压疾病孕妇和正常血压孕妇的子宫小动脉平滑肌细胞中BKca通道的α亚基和β1亚基的mRNA和蛋白量表达水平,分析BKca通道α亚基和β1亚基的改变与妊娠期高血压疾病的发病关系,探讨BKca通道α亚基和β1亚基在妊娠期高血压疾病中的作用。方法:（1）HE染色实验:（1）收集2014年10月至2015年8月期间在泸州医学院附属医院产科行剖宫产术终止妊娠的妊娠期高血压疾病（排除慢性高血压合并子痫前期和慢性高血压合并妊娠）患者的子宫小动脉作为病例组,即HDCP组,共40例,同期收集正常血压的因瘢痕子宫、骨盆狭窄或社会因素等行剖宫产术终止妊娠孕妇子宫小动脉作为对照组,即NP（normal pregnancy）组,共40例;（2）分离出子宫小动脉,取小部分动脉甲醛固定;（3）常规石蜡包埋,4μm切片,脱蜡,经各级乙醇至水洗,染色,脱水,透明,封片,显微镜下观察是否为小动脉,照相并比较NP组和HDCP组有何不同。（2）实时荧光定量PCR实验（QPCR）:（1）在经HE染色认证后的病例组和对照组标本中,各取20例作为研究对象;（2）提取子宫小动脉血管平滑肌总RNA、用紫外分光光度计检测总RNA浓度、利用逆转录聚合酶链式反应（ImPCR）技术将提取的总RNA逆转录成cDNA,以GAPDH为内参基因,进行SYBR Green I实时荧光定量PCR反应,得到相应的Ct值,计算出△Ct值（即目的基因Ct值-内参基因的Ct值）、△△Ct值（即HDCP组基因的△Ct值-NP组基因的△Ct值）及2-△△Ct值（即表示HDCP组基因是NP组基因的几倍数）。在SPSS19软件上使用t检验进行统计学分析,比较NP组和HDCP组所检测基因BKcaα、BKcaβ1mRNA的变化;（3）将目的基因和内参基因的所有PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳并成像保存,直观比较其表达量的差异。（3）免疫印迹法（即Western blotting实验）:（1）经HE染色认证但未用于QPCR实验的病例组和对照组标本各20例;（2）液氮中捣碎组织,加适量的裂解液提取子宫小动脉血管平滑肌总蛋白并测定蛋白浓度;（3）SDS-PAGE电泳后转至PVDF膜上,抗体孵育,Bio-Rad凝胶成像系统成像后保存,用Quantity-One软件测量灰度值,以GAPDH为内参校正得到目的蛋白相对表达量,应用SPSS19软件t检验进行统计学分析,比较NP组和HDCP组BKcaα、BKcaβ1蛋白相对表达水平的变化。实验结果以均数±标准差（xˉ±s）表示,P<0.05时,认为差异有统计学意义。结果:（1）NP组和HDCP组各40例均为符合实验要求的子宫小动脉组织,HDCP组有24例,其中轻度子痫前期5例、重度子痫前期18例,子痫1例,（占HDCP组的60%）切片上可见急性粥样坏死改变。（2）QPCR实验检测结果:最终HDCP组和NP组各有17例获得有效数据。HDCP组BKcaα亚基△Ct值为1.7671±0.7071（n=17）,NP组BKcaα亚基△Ct值为1.7549±0.8423（n=17）,两组比较BKcaαmRNA差异无统计学意义,（P=0.964>0.05）;HDCP组BKcaβ1亚基△Ct值为1.8820±0.4256（n=17）,NP组BKcaβ1亚基△Ct值为1.4515±0.2280（n=17）,两组比较BKcaβ1 mRNA差异有统计学意义,（P=0.001<0.05）;BKcaβ1亚基2-△△Ct值为0.7677±0.1987,故HDCP组基因BKcaβ1 mRNA水平低于NP组;从PCR扩增产物电泳后凝胶成像条带图中可以看出,本实验无其他异二聚体干扰,HDCP组与NP组均有BKcaαmRNA和BKcaβ1 mRNA的表达,且BKcaαmRNA在两组的表达水平无明显差异,而BKcaβ1 mRNA在HDCP组中的表达明显减弱。（3）Western blotting实验检测结果:HDCP组18例实验数据有效;NP组20例均实验成功,但其中有2例所得灰度值远大于其他标本,故排除。HDCP组BKcaα/GAPDH灰度值比值为0.1115±0.0487（n=18）,NP组为0.1004±0.0306（n=18）,两组比较BKcaα蛋白表达水平差异无统计学意义,（P=0.416>0.05）;HDCP组BKcaβ1/GAPDH灰度值比值为0.4904±0.1899（n=18）,NP组为0.8009±0.3250（n=18）,两组比较BKcaβ1蛋白表达水平差异有统计学意义,（P=0.002<0.05）,HDCP组BKcaβ1蛋白表达水平低于NP组。结论:（1）在排除慢性高血压的妊娠期高血压疾病状态下,人子宫小动脉血管平滑肌中可能出现急性粥样改变。（2）在排除慢性高血压的妊娠期高血压疾病状态下,人子宫小动脉血管平滑肌离子通道BKcaα亚基编码的mRNA和蛋白水平均无明显变化。（3）在排除慢性高血压的妊娠期高血压疾病状态下,人子宫小动脉血管平滑肌离子通道BKcaβ1亚基的mRNA和蛋白表达水平均明显下调。这提示离子通道BKCa的功能改变可能参与了HDCP的发生,β1亚基的下调性改变可能是导致妊娠期高血压疾病全身小血管舒缩功能障碍的一个关键点。