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依赖随机化末端连结物PCR (Randomized terminal linker-dependent PCR, RDPCR)是以连接介导PCR (Ligation-mediated PCR, LMPCR)为基础建立起来的,可以定位检测任何类型DNA损伤的一种分子生物学方法。目前该法已成功应用于体外细胞染毒实验和体内动物实验,来检测p53基因、ras基因的损伤,但仍未有应用于人群流行病学研究的报道。Southern杂交技术能将PCR过程中产生的特异性片段检测出来,具有快速、灵敏、准确等优点,被广泛的应用于鉴别DNA分子中的特异碱基序列等各项研究中。无机砷进入机体会导致细胞DNA损伤,这些损伤部位也包括p53基因,而p53基因的损伤可能是砷遗传毒性和致癌作用分子机制的关键所在。检测职业砷暴露人群p53基因的特定损伤位点,对于研究砷的致癌效应和遗传毒性具有重要意义。目的：1)将RDPCR方法结合Southern blot杂交技术应用于人群流行病学研究,为RDPCR的推广和应用积累资料；2)定性检测p53基因第五外显子损伤,验证前期研究结果,并为进一步精确定位损伤位点奠定基础。方法：1)离心柱法提取外周血液样本基因组DNA,双引物扩增p53基因第五外显子双链并纯化；2)制作单链探针,并检测其可靠性；3)以纯化的p53基因第五外显子为模版进行RDPCR扩增,终产物凝胶电泳后进行Southern blot杂交,鉴定基因损伤。结果：1)经检测,根据琼脂糖凝胶电泳及与双链外显子杂交结果证实探针制备成功并可靠；2)完成检测的68例暴露样本和7例对照样本中,30例暴露样本明确检测到目标基因的损伤,对照样本均未测到损伤,暴露组损伤率为44.1%,对照组损伤率为0,暴露组损伤率显著高于对照组(P<0.05)；3)各损伤条带的凝胶电泳和杂交条带出现位置大致相同,略滞后于外显子双链位置。结论：本研究从定性角度进一步证实了前期采用实时荧光定量方法检测的两组样本p53基因第五外显子损伤情况；各损伤样本经检测所得的杂交条带位置基本一致,初步判断砷致p53基因第五外显子损伤具有特定位点,进一步可采用克隆测序等技术确认具体损伤位点；本研究成功将该技术应用于人群分子流行病学研究,进一步扩展了该技术的应用范围。