论文部分内容阅读
第一部分利用二氧化硅微粒捕获孕妇外周血中胎儿有核红细胞的研究目的:探讨基于二氧化硅微粒的方法捕获孕妇外周血中胎儿有核红细胞的可行性。同时,确定基于此方法捕获孕妇外周血中胎儿有核红细胞的最佳孕周。方法:1.孕妇外周血先经密度梯度离心法离心获得单个核细胞层,然后用抗CD147抗体修饰的二氧化硅微粒对单个核细胞层进行目的细胞捕获,并进行CD71+/ε-HbF+/DAPI+三色荧光染色鉴定;2.以有核红细胞系为模型,分别用不同浓度抗体（1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml和50μg/ml）,不同数量（1×104/ml、5×104/ml、10×104/ml和50×104/ml）以及不同修饰方法的二氧化硅微粒捕获细胞,获得最佳的细胞捕获条件;3.利用优化的条件捕获不同孕周的孕妇血液循环中的胎儿有核红细胞,并分别计数不同孕周的孕妇血液循环中胎儿有核红细胞的数量。结果:1.用结合抗CD147抗体的二氧化硅微粒捕获到的孕妇外周血中的细胞,经CD71+/ε-HbF+/DAPI+三色荧光染色鉴定证实其为胎儿有核红细胞;2.10×104/ml二氧化硅微粒结合10μg/ml抗CD147抗体具有最佳捕获效率（P<0.05）,与未经链霉亲和素修饰的微粒相比,修饰链霉亲和素后细胞捕获效率明显增高（P<0.05）;3.孕妇外周血中的胎儿有核红细胞数量在孕12-20周平均为（53.40±11.15）个/ml,17+2周孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量最多,约为75个/ml。结论:孕妇外周血中的胎儿有核红细胞可用基于二氧化硅微粒的方法进行捕获,用于细胞捕获的最佳孕周为孕17周左右。第二部分二氧化硅微粒捕获母血中胎儿有核红细胞鉴定胎儿ABO血型的研究目的:探讨基于二氧化硅微粒捕获的孕妇外周血中胎儿有核红细胞用于胎儿ABO血型鉴定的可行性。方法:1.利用二氧化硅微粒捕获孕妇外周血中的胎儿有核红细胞,提取所捕获细胞的基因组DNA。随访孕妇至分娩,采集对应新生儿的脐静脉血并提取脐血DNA,通过序列特异性引物引导的PCR技术分别检测胎儿及新生儿的ABO血型基因型,并通过血清学方法检测新生儿ABO血型;2.对于与孕妇血型相同的男胎,通过PCR法检测胎儿SRY基因来进一步证实捕获细胞为胎儿细胞。结果:1.基于二氧化硅微粒捕获孕妇外周血中胎儿有核红细胞用于胎儿ABO血型鉴定的准确率为86.7%（52/60）;2.对于与孕妇血型相同的男胎而言,SRY基因检出率为100%（14/14）。结论:基于二氧化硅微粒的材料所捕获的胎儿有核红细胞可用于胎儿ABO血型的鉴定,进一步证明该方法用于无创产前检测具有可行性。