【摘 要】
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目的这项研究旨在探讨白细胞介素17A(IL-17A)是否可能具有促进间充质干细胞(MSCs)体外进行神经向分化的能力,并研究相关的分子机制。方法首先使用全骨髓贴壁法体外培养大鼠的
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目的这项研究旨在探讨白细胞介素17A(IL-17A)是否可能具有促进间充质干细胞(MSCs)体外进行神经向分化的能力,并研究相关的分子机制。方法首先使用全骨髓贴壁法体外培养大鼠的骨髓间充质干细胞(BMSCs),然后在神经分化诱导培养基模拟神经源性分化的过程中,将不同浓度的IL-17A(浓度范围设置为5 ng/ml,10 ng/ml,20 ng/ml,30 ng/ml,40 ng/ml)应用于大鼠的骨髓MSCs中。采用RT-q PCT和形态学分析的方法确定IL-17A促进骨髓间充质干细胞向神经向分化的最佳浓度。随后,我们在BMSCs神经源性分化的基础上用最佳浓度的IL-17A继续诱导其进行神经分化。通过RT-q PCR和WB的方法检测成神经相关基因和蛋白Tubulin、Hes-1和Thy-1的表达,并通过吉姆萨染色法和免疫荧光染色法探究细胞的形态学变化和成神经特异性标记物Thy-1表达的情况。此外,我们仍然通过RT-q PCR和WB的方法检测与成神经有关的信号通路相关基因和蛋白Jagged-1、Notch-1、Wnt3a和β-catenin的表达。并紧接着仍然通过吉姆萨染色法和免疫荧光染色法探究细胞的形态学变化和成神经特异性标记物Thy-1和CD24表达的情况。使用Graph Pad Prism 6.01软件对图像和数据进行处理和分析,所有数据均表示为平均值±SE。我们获得的P值小于0.05,被认为具有统计学意义。结果采用RT-q PCT和形态学分析的方法确定IL-17A促进骨髓间充质干细胞向神经向分化的最佳浓度为20 ng/ml。我们使用RT-q PCR、WB、吉姆萨染色法和免疫荧光染色法等方法确定了20 ng/ml的IL-17A对大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞的分化具有较好的促进效果。在机制上,我们使用上述同样的方法发现,在细胞神经分化过程中,Wnt/β-catenin信号通路的传导途径被激活并且Notch信号通路的传导途径被抑制。此外,这两条信号通路在调节IL-17A诱导BMSCs神经源性分化过程中具有一定的拮抗作用。结论最佳浓度为20 ng/ml的IL-17A具有较强的促进大鼠骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化的能力。在机制上,Wnt/β-catenin信号通路被激活并且Notch信号通路被抑制与这个分化过程相关。
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