论文部分内容阅读
背景肺癌是一种高发生率和高死亡率的恶性肿瘤,迄今为止其发生机制尚不清楚。microRNA-21是一类非编码的小分子RNA,参与基因转录后水平的调控,在多种肿瘤组织中表达上调。PDCD4是一种肿瘤抑制基因,也是microRNA的重要靶基因,二者发生转录后基因沉默。microRNA-21/PDCD4的通路异常在肺癌的发生发展中的意义,目前鲜有报道。本课题通过实时荧光定量PCR (qRT-PCR)等手段,检测大鼠肺鳞癌中microRNA-21、PDCD4的表达,探讨microRNA-21/PDCD4表达及关系对大鼠肺鳞癌发生发展的影响,进而为临床防治肺癌提供新的思路和科学依据。目的通过检测microRNA-21和PDCD4在大鼠肺鳞癌发生过程中的表达,分析两者之间的相关性并探讨其临床意义。方法1.构建大鼠肺癌模型：随机分为60只实验组大鼠,将含有致癌溶剂的碘油溶液0.1ml,注入大鼠的支气管；对照组10只大鼠,于左肺下叶支气管注入0.1m1碘油。按时处死大鼠,获取肺鳞癌形成过程中各阶段的标本,制成石蜡包埋块,进行HE染色,显微镜下诊断分型；2. qRT-PCR检测各个阶段病变组织中microRNA-21的表达水平；3.原位杂交检测各个阶段病变组织中PDCD4mRNA的表达水平；4.免疫组化检测各个阶段病变组织中PDCD4蛋白表达水平；5.使用SPSS17.0统计软件将数据统计分析。结果1.动物模型60只实验组大鼠中,诱癌成功率达到了80%(48/60)。癌变的标本中包含多个阶段病变共存：支气管粘膜上皮增生组织21例,不典型增生组织15例,浸润癌26例,转移癌20例。对照组中10只大鼠均未见肿瘤发生。2. microRNA-21的表达qRT-PCR检测microRNA-21的表达结果如下：对照组0.0019±0.0009；不典型增生组0.0190±0.0027；浸润癌组0.0608±0.0051；转移癌组0.1591±0.0255。对照组和实验组之间比较存在差异性(p<0.05),实验组各组之间比较存在差异性(p<0.05)。3.PDCD4基因和蛋白水平的表达PDCD4mRNA检测表达含量结果如下：对照组为0.6930±0.1243；不典型增生组为0.5600±0.1006；浸润癌组为0.4900±0.1900；转移癌组为0.3982±0.1243。实验组和对照组相比较,差异有统计学意义(P<0.05),其他各组相比较,差异均有统计学意义(p<0.05),在癌组织中PDCD4的表达均低于不典型增生组和对照组(p<0.05)。根据免疫组化评分标准PDCD4蛋白在不同发病阶段的表达结果如下：对照组为0.7050±0.1327；不典型增生组为0.5747±0.1601；浸润癌组为0.4717±0.0710；转移癌组为0.3700±0.1042。实验组与对照组比较有差异有统计学意义(p<0.05),不典型增生组、浸润癌组和转移癌组组内之间相比差异也具有统计学意义(P<0.05),在癌组织中PDCD4蛋白的表达均低于不典型增生组和对照组(P<0.05)。免疫组化和原位杂交检测PDCD4蛋白和基因的表达具有一致性(r=0.875,P<0.01)。4. microRNA-21和PDCD4之间的相关性在肺鳞癌组织中,microRNA-21和PDCD4基因的表达呈负相关(r=-0.582, P<0.01), microRNA-21和PDCD4蛋白的表达呈负相关(r=-0.598,P<0.01)；结论1.在肺癌中microRNA-21呈高表达,PDCD4呈现低表达,两者呈负相关与肺癌的发生、发展密切相关。2. MicroRNA-21在转录后水平调控PDCD4的表达,联合检测有利于肺癌的早期诊断。