浒苔(Ulva prolifera)遗传转化体系的建立

来源 :中国科学院研究生院(海洋研究所) | 被引量 : 2次 | 上传用户:l441060226
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
浒苔(Ulva prolifera)是多细胞大型海洋绿藻,是近年黄海大规模绿潮的唯一优势种,其暴发成灾具有明显的生物学基础。目前已开展广泛深入的研究,获得了大量基因序列并初步注释了功能,亟待建立个体水平基因功能验证的有效方法。建立浒苔遗传转化与稳定表达技术,可为相关研究提供有力工具,同时,也可为构建浒苔重组蛋白高效表达系统奠定基础,发挥浒苔生长速度快、蛋白质含量高、可于封闭水体安全培养的突出优势。本文从遗传材料、再生方式、转化手段、筛选方法四个方面入手,对浒苔遗传转化体系的构建开展了系统研究:在遗传材料方面,发明了利用水蚤(Tigriopus japonicus)清除杂藻污染的方法,获得了遗传均一的单克隆材料,使用封闭水体充气培养装置实现了藻株的高效营养增殖,为遗传转化研究提供了材料保障,为将来构建安全表达系统创造了条件。在再生方式方面,分别建立了生殖细胞诱导放散与萌发、营养细胞原位萌发、原生质体酶解制备与再生共三种途经,均能实现浒苔单细胞再生成株,发现了酶解效率的相关性生理生化指标。在转化手段方面,比较了基因枪法和原生质体介导的玻璃珠法。通过基因枪法检测到报告基因GUS和lacZ在浒苔细胞中的瞬间表达,初步确定浒苔适用的基因枪参数与载体元件。在原位萌发再生苗中检测到了GUS基因的全株表达。在筛选方法方面,试验了浒苔再生苗对六种抗生素和一种除草剂的敏感性,发现对氯霉素和潮霉素较敏感,对草丁膦非常敏感,统计得到不同处理时间的LD50,发现草丁膦敏感性与光周期明显相关。本文通过对上述四个方面的系统研究,获得了实验材料、建立了再生方式、实现了基因表达、明确了筛选流程,为后续浒苔稳定表达系统的构建奠定了必要的方法学基础。
其他文献
目的:观察胰岛素联合阿卡波糖对2型糖尿病(T2DM)合并高血压(EH)患者血糖、血脂、血压水平的影响。方法:本院2017年~2018年的92例T2DM+EH患者被随机均分为胰岛素组(在常规治疗
随着工业化程度的不断加深,生态环境以及生态资源的供应都遭到了一定的破坏。特别是最近几年雾霾问题,土壤沙漠化问题,温室效应的问题都逐渐的展现出来。虽然我国的生态资源
目的:比较不同转运模式下急性非ST段抬高型心肌梗死(NSTEMI)患者临床特点,并分析其对患者的预后影响。方法:回顾性分析本院2015年12月-2018年12月收治的NSTEMI患者的临床资料
近年来,我国大气臭氧污染日益严峻,臭氧作为二次污染物,其产生的原因复杂,治理难度大,给生态环境部门和各级人民政府带来巨大压力。本文通过重庆市某工业城区臭氧污染现状,分
免疫细胞及其介质直接引起的慢性动脉炎症是动脉粥样硬化(AS)的特点,白细胞介素(IL)-17是主要促炎性细胞因子。近年来,关于IL-17在AS中的多效性及其功能的探讨逐渐深入。本文
森林采伐作为最主要的森林经营方式,对土壤碳储量以及碳过程均产生着复杂的影响。科学认识采伐干扰下森林土壤碳库维持机制以及碳固定过程的特征,确定合理的森林经营措施,增
水资源是人类生存发展的前提,水资源的开发利用是国家一直以来关注的重点。我国水资源排名世界第四,然而人口数量为14亿,综合下来人均排名却在121位,联合国也将我国列为世界1
在干旱区和半干旱区生态系统中,灌木“肥岛”对植被的生产力、分布格局以及生态系统过程具有重要影响。土壤微生物在凋落物分解、养分循环中起着重要作用,是灌木“肥岛”形成
钢渣粉与矿渣粉复掺作为水泥混凝土的掺合料应用,是提高钢渣高附加值利用的重要途径。现有的国家标准《钢铁渣粉》(GB 28293-2012)给出了复掺粉的活性等级,但对于每个等级的
经皮穴位电刺激(Transcutaneous electrical acupoint stimulation,TEAS)是融合了我国传统针灸治疗和经皮神经电刺激(TENS)技术的一类重要的补充和替代医学方法,既抑制外周疼