异氟烷对原代培养的缺氧/复氧损伤心肌细胞活性氧及线粒体通透性转换的影响

来源 :徐州医学院 徐州医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:penghong97
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目的: 在原代培养SD乳鼠心肌细胞上观察挥发性麻醉剂异氟烷(Isoflurane,Iso)对缺氧/复氧(Hypoxia/Reoxygenation,H/R)损伤心肌细胞活性氧(Reactive oxygen species,ROS)及线粒体通透性转换(Mitochondrial permeability transition,MPT)的影响。   方法: 1~3日龄SD乳鼠心肌细胞原代培养48h后,采用三气培养箱建立缺氧/复氧(H/R)模型。将培养细胞按孔随机分为7组(n=6),并在心肌细胞缺氧期给予挥发性麻醉剂Iso和线粒体通透性转换孔(Mitochondrial permeability transition pore,MPTP)开放剂苍术苷(Atractyloside, Atra)处理:(1)Normal组:在37℃的CO2培养箱中孵育心肌细胞5h(95% Air + 5% CO2);(2)H/R组:缺氧(95% N2 + 5% CO2 , FiO2﹤1%)3h,复氧(95% Air + 5% CO2)2h;(3)Atra组:缺氧3h,缺氧期给予20μM的Atractyloside,复氧2h;(4)Iso0.1组:缺氧3h,缺氧期给予0.1mM Isoflurane,复氧2h;(5)Iso0.2组:缺氧3h,缺氧期给予0.2mM Isoflurane,复氧2h;(6)Iso0.4组:缺氧3h,缺氧期给予0.4mM Isoflurane,复氧2h;(7)Iso0.4+ Atra组:缺氧3h,缺氧期给予0.4mM Iso 和20μM的Atra,复氧2h。复氧30min后,采用DCFH-DA荧光法检测心肌细胞内活性氧生成;复氧50min后,以Calcein-AM染色心肌细胞,观察心肌细胞内线粒体MPTP的开放情况;复氧2h后,采用MTT法、TUNEL法观察心肌细胞活力、凋亡情况。   结果: 复氧2h后,Normal组、 Iso0.1组、Iso0.2组、Iso0.4组、Iso0.4+ Atra组的吸光度明显高于H/R组、Atra组(P < 0. 01);H/R组吸光度与Atra组比较,差异无显著性(P > 0.05)。Normal组、Iso0.1组、Iso0.2组、Iso0.4组、Iso0.4+ Atra组细胞凋亡明显少于H/R组和Atra组;H/R组凋亡与Atra组差异无显著性。Normal组、Iso0.1组、Iso0.2组、Iso0.4组、Iso0.4+ Atra组活性氧的生成明显少于H/R组和Atra组;H/R组活性氧生成与Atra组差异无显著性。复氧50 min后,Normal组、H/R组、Atra组、Iso0.1组、Iso0.2组、Iso0.4组、Iso0.4+ Atra组Calcein保留在线粒体内,胞浆荧光强度较弱;H/R组、Atra组Calcein从线粒体释放到胞浆,胞浆荧光强度较强。   结论:   (1)缺氧期Iso处理可以减少缺氧/复氧损伤引起的心肌细胞凋亡,保存细胞活力,产生明显的心肌保护作用;   (2)Iso处理产生的心肌保护作用与减少心肌细胞内活性氧生成以及抑制线粒体通透性转换孔开放有关;   (3)缺氧期给予Atra不能增加ROS的生成,不能促进心肌细胞线粒体MPTP的开放,不能减弱Iso的心肌保护作用。
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