不同生长时期RPE吞噬和凋亡情况的实验研究

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[目的]研究视网膜色素上皮细胞(RPE)特异性吞噬感光细胞外节段(POS)的能力以及吞噬负荷诱导下不同生长时期RPE凋亡的情况,从而为临床上一些与RPE吞噬功能相关的疾病提供一定的理论依据。   [方法]体外培养新生期、青年期和老年期牛RPE,将FITC-POS悬浮液加入80~90%融合三代RPE细胞单层,用荧光显微镜及其定量分析系统观察第1、2、3、4、5、6个小时时RPE吞噬POS的总量、内吞量和结合量的动态变化,并且比较新生期、青年期和老年期RPE的吞噬能力之间的差别。免疫组化检测不同发育阶段RPE上参与结合阶段的受体-αvβ5整合素受体的表达量。由于吞噬诱导的RPE凋亡是一个相对比较缓慢的过程,所以在吞噬物-甲醛处理后的血清白蛋白(FSA)吞噬负荷诱导下,用流式细胞仪检测新生期、青年期和老年期牛体外培养三代RPE在24、48和96小时时的凋亡情况。   [结果]新生期、青年期和老年期牛RPE与FITC-POS孵育6小时之内的动态吞噬规律基本上相同,吞噬有1个小时的延迟,第2和第3个小时吞噬总量大量增加,之后继续缓慢增加达到一个稳定的水平。而内吞量主要是在孵育后第3、4、5个小时内迅速增加,第6个小时达到稳定。新生期、青年期、老年期牛RPE在吞噬功能方面有显著的差异,新生期和青年期牛RPE无论吞噬总量还是内吞量都要比老年期牛RPE多,而新生期和青年期牛RPE之间没有明显的统计学意义。参与结合阶段的受体-αvβ5整合素受体在三种RPE上的表达量没有差别。在FSA吞噬负荷诱导下,新生期、青年期、老年期RPE都出现了明显的凋亡和死亡,并且随着时间的增加,比例增加。从比例上来说,老年期和新生期牛RPE的凋亡率要高于青年期牛RPE。   [结论]新生期RPE已经具备了比较完善的特异性吞噬POS的能力,并且超过了一定的年龄阶段之后,吞噬功能会出现一定程度的下降。对于吞噬负荷的抵抗能力,新生期和老年期RPE要低于青年期RPE.。由此说明,年龄相关性的黄斑变性(AMD)可能与RPE吞噬能力的下降有一定的关系。
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