急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种特殊类型白血病，它具有特征性的分子生物学特征，即t(15；17)染色体易位和PML／RARα融合基因，90％以上患者对全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)治疗有效，迄今为止，我们对它的细胞生物学行为特征了解的很有限。近年来，新发现了一类凋亡抑制蛋白家族(IAPs)，survivin是其中成员之一。目前研究显示，survivin基因具有抗凋亡功能，其组织细胞分布有明显的特征性，肿瘤细胞和胚胎期组织细胞有survivin基因表达，而正常组织细胞不表达。在神经母细胞瘤中发现survivin表达预示着肿瘤有侵袭性，在结肠癌、非小细胞性肺癌和乳腺癌中发现survivin基因表达与患者预后有密切相关性。survivin基因在急性白血病患者中广泛表达，而在急性早幼粒细胞白血病细胞中的表达情况不详，因此，本实验研究目的是弄清楚survivin基因在急性早幼粒细胞白血病细胞中的表达情况，并探讨此基因调控机制。 实验分三部分进行。第一部分，检测survivin基因在血液肿瘤细胞株细胞中的表达；第二部分，检测survivin基因在急性早幼粒细胞白血病细胞中的表达；第三部分，探讨全反式维甲酸，促粒细胞生长因子，植物血凝素和survivin反义寡聚核苷酸对NB4细胞株细胞survivin基因的调控作用。 在第一部分中，我们采用RT-PCR半定量法对10种不同类型的白血病细浙江大学博士学位论文胞株和淋巴瘤细胞株细胞survivin泌浏A表达进行了检测。实验结果显示，10种血液肿瘤细胞株和k562/A服耐药细胞株细胞均有survivin mRNA表达，且均高于疾病对照组，P<0.ool;不同类型的血液肿瘤细胞株survivin砍NA表达有明显的差异性，Dami与k562，HL币0，Jurkat，MUTZ一1，Raji，6T一CEM;N以与U937，HEL，6T一CEM，和rkat，D二i:HEL与MUTZ一1之间的survivin功RNA表达具有显著性差异，p值<0 .001众05。k562/ADM细胞株与k562细胞株细胞相比，其survivin mRNA表达量增加了1.6倍。正常人外周血单个核细胞survivin mRNA为阴性表达。 我们还检测了20例非血液肿瘤患者骨髓单个核细胞s班vivin mRNA表达，发现2例全血细胞减少患者为弱阳性表达(此两例患者病因不清)，而单纯性血小板减少性紫瘫、白细胞减少症和缺铁性贫血患者为阴性表达。我们用阿霉素诱导K562细胞产生MDRI表型后，发现其s切，ivin切RNA表达也随之被上调，这表明k562阴刃M细胞株细胞sllrvivin基因可能参与了k562/A以M细胞株细胞的耐药机制。 在实验第二部分，我们检测了36例初、复发和22例缓解期急性早幼粒细胞白血病患者骨髓单个核细胞survivin基因表达，同时检测了23例急性白血病和48例慢性粒细胞白血病患者骨髓单个核细胞5 urvivin基因表达。实验结果表明，1.36例初、复发APL细胞均有P讯/RARa融合基因表达，其中survivin mRNA阳性表达率为67%;22例缓解期APL细胞PML/RARa基因表达均为阴性，其中survivin InRNA阳性表达率为36%。初、复发组，PML/以Ra基因长型阳性组与缓解组相比，survivin诫NA表达阳性率均明显增高(两者P值均<0 .05)，而与急性白血病组相比survivin mRNA表达阳性率均明显减低(两者P值分别<0.05，<0‘001)。2.不论survivin mRNA表达阳性抑或阴性，36例初、复发APL细胞经ATRA治疗后都能达到cR;临床上拼发DIC和严重感染的4例APL患者的survivin mRNA表达皆为阳性(其中1例死亡)，而survivin mRNA表达阴性的APL患者临床症状均较轻，只有轻微皮肤粘膜出血、发热和乏力等症状，2例survivin mRNA表达阳性APL患者经用ATRA治疗后，其外周血象和骨髓象诱导分化征象不明显。3.23例AL浙江大学博士学位论文患者骨髓单个核细胞测南城n mRNA表达阳性率为91%，48例C侧[L患者骨髓单个核细胞s讯vivin mRN’A表达阳性率为83%，其中cP，AP和BP的阳性表达率分别为83%、100%(2例/2例)和100%(5例/5例)。非血液肿瘤患者组与AN[L、A工L、C洲[L和八卫L组相比，APL初复发组与缓解组相比，APL初复发和缓解组与A加IIJ、ALL、C入几组相比均具有统计学差异，杯0.05。 在实验第三部分，我们初步探讨了调控 survivin基因表达的影响因素。以NB4和HL一60细胞株为实验对象，采用体外细胞培养、形态学观察和RT-PCR半定量检测survivin mRNA表达的方法，实验结果显示，在10种已检测的细胞株中，早幼粒细胞白血病细胞株细胞NB4的s班vivin基因表达量最高，而经1 p mo比户丁RA处理后，随着作用时间延长，细胞分化抗原CDllb表达量逐渐增高，而CD33表达量逐渐减低，且在基因转录水平上观察到surVivin基因表达下调;细胞周期分析表明，细胞周期阻滞于G0一G，期，实验证明，在细胞由增殖转为分化成熟时，sury ivin基因表达也随之下调。ATRA对王几.60细胞株细胞survivin IllRNA表达有下调作用。G一CSF，GM-CsF均能使NB4和HL·60细胞株细胞survivin mRNA表达上调，这从基因转录水平上证明了细胞因子对survivin基因的调控作用。用植物血凝素(PHA)刺激l几一60细胞株细胞，随着作用时间延长，其s肚vivin基因表达上调，说明细?