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目的通过lnc RNA RP4-612B15.3慢病毒质粒的构建并观察其对SW-480细胞株的影响,从而探索lnc RNARP4-612B15.3在结直肠癌发生发展过程中的作用。方法通过转染lnc RNARP4-612B15.3模拟体及构建过表达lnc RNARP4-612B15.3逆转录病毒载体并感染人结直肠癌细胞sw480细胞来上调lnc RNARP4-612B15.3的表达水平,观察过表达lnc RNARP4-612B15.3对sw480细胞株的增殖、凋亡、的影响,以探索lnc RNARP4-612B15在结直肠癌发生发展过程中的作用。结果通过荧光纤维镜观察,荧光细胞数随稀释倍数增加而相应减少;慢病毒滴度检测结果为:LV3-sh-lnc RNA RP4-612B 15.3的值为8x108TU/ml;LV5-NC3x108TU/ml;lnc RNA RP4-612B15.3的值为4x108TU/ml;LV3-NC 5x108TU/ml。流式细胞仪检测Sh-lnc RNA RP4-612B15.3阳性率为99.8%;lnc RNA RP4-612B15.3阳性率为96.3%;细胞侵染效率大于70%,提示慢病毒感染lnc RNA RP4-612B15.3慢病毒干扰表达载体(LV-Sh-lnc RNA RP4-612B15.3)制作合格。随着lncRNARP4-612B15.3的上调,在结直肠癌细胞SW-480的表达也明显降低。对慢病毒感染构建稳定过表达lnc RNARP4-612B15.3的SW-480细胞株的检测我们发现随着lnc RNARP4-612B15.3浓度的上调,病毒细胞株的数目减少及凋亡的速度增加,两者呈反相关关系。由此我们推测lnc RNARP4-612B15.3可能通过降低其表达水平,影响整个细胞基因组的不稳定性增加,从而在一定意义上发挥了促进结直肠癌的发生与发展的作用。Western检测相关蛋白表达变化,lnc RNA RP4-612B15.3的过表达可以显著提升Caspase3的表达水平,两者呈正相关关系。干扰后lnc RNA RP4-612B15.3(Sh-Lnc-RP4)显著降低了Caspase3的表达水平。结论1.lnc RNARP4-612B15.3病毒质粒构建成功(LV-shlnc RNARP4-612B15.3);并能高效感染SW-480细胞株。2.lnc RNARP4-612B15.3能够促进结直肠癌细胞SW-480的凋亡;3.随着lnc RNARP4-612B15.3浓度的上调,病毒细胞株的数目减少及凋亡的速度增加,两者呈反相关关系。lnc RNARP4-612B15.3可能通过降低其表达水平,影响整个细胞基因组的不稳定性增加,从而在一定意义上发挥了促进结直肠癌的发生与发展的作用。4.lnc RNA RP4-612B15.3的高表达可以显著提升Caspase3的表达水平,两者呈正相关关系,干扰后lnc RNA RP4-612B15.3(Sh-Lnc-RP4)显著降低了Caspase3的表达水平;由此得出在结直肠癌中lnc RNARP4-612B15.3下调是通过降低Caspase3活化的途径而起到抑制肿瘤细胞凋亡。