马鼻肺炎是马属动物的主要传染病之一,主要传播途径为接触性传播,即健康马匹通过接触排毒期马匹的排泄物,或与排毒期马匹共同进食,都会感染该病。该病病原分别是马疱疹病毒1型(Equine herpesvirus1,EHV-1)和马疱疹病毒4型(EHV-4)。感染EHV-4的患畜临床病征表现为呼吸道疾病、发热、食欲不振等；而感染EHV-1的患畜则更为严重,除表现出4型临床表征外,还会引起孕马流产、新生马驹死亡、神经系统疾病等症状。虽然感染马鼻肺炎后死亡率不高,但是其引起的后遗症会给种马、赛马等带来巨大的健康隐患。目前防制该病所采取的主要措施为疫苗免疫,通常为传统的灭活苗和减毒苗,国内目前还没有商品化的马鼻肺炎疫苗,因此,制备一株能够有效防制我国该病的疫苗则具有理论和实际意义的。本实验选取了2010年从黑龙江省分离到的马疱疹病毒,经测序分析,其gG基因与EHV-8亚型同源性高达99%以上,而其他几个影响病毒毒力的主要蛋白基因序列与标准EHV-1有90%以上的同源性。该毒株通过马体人工感染试验可引发马鼻肺炎临床表征。用该毒株经马胎皮细胞进行传代,稳定传10代后,病毒毒力保持在106TCID50/mL左右。用灭活剂β-丙内酯(BLP)灭活方法可直接作用于病毒核酸,不会破坏病毒蛋白结构,使被灭活的病毒保持较好的免疫原性；易水解,灭活后在37℃条件下水浴2h即可完全降解,水解产物为β-羟基丙酸。灭活后的病毒通过蔗糖密度梯度离心和超滤两种方式进行纯化,通过比较纯化后疫苗诱发的免疫效果可以看出,两者纯化效果相似,但是超滤方法更为简便。本研究分别建立了以纯化的疫苗株为抗原的间接ELISA及定量检测EHV-1、EHV-8DNA的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR进行检测免疫动物产生的抗体水平以及人工感染后的排毒情况。试验动物选择6周龄Balb/c雌鼠,分别于Od、17d和38d进行免疫,在三次免疫后取小鼠血清进行病毒中和试验,中和抗体效价可达1：100,并用马鼻肺炎病毒株攻击以及通过定量PCR检测小鼠肺组织内病毒DNA变化,、免疫组小鼠组织内病毒DNA含量要明显少于同时期的对照组小鼠。同时马体免疫试验结果也表明,该灭活疫苗能够诱导马产生具有抵抗强毒攻击的抗体水平。本实验制备的马鼻肺炎灭活疫苗能够有效的引起试验对象产生抗体,且其效价水平可达到抵抗疫苗株病毒攻击的保护标准。