金雀异黄素对培养人视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响

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目的 孔源性视网膜脱离或视网膜脱离手术后并发的增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR),其病理改变的特征是一系列的细胞活动,主要是视网膜色素上皮细胞(retinalpigment epithelial cell,RPE)发生迁移,增生,形态变化,合成某些蛋白质和细胞外基质,形成可以收缩的膜,属于临床上的难治性疾病。已有的研究发现,PVR是一种过度的创伤愈合过程,存在着RPE的异常增殖和死亡的失衡。如何抑制RPE增殖和诱导其向凋亡方向发展,对PVR的转规有着重要的意义。金雀异黄素是一种天然的酪氨酸激酶抑制剂,可以抑制多种肿瘤细胞的增殖,并诱发细胞凋亡。本实验旨在研究金雀异黄素对RPE的增殖和凋亡的影响。 方法 通过MTT比色法和核仁嗜银蛋白染色分析,观察金雀异黄素对RPE增殖的影响;通过TUNEL染色和形态学观察,研究金雀异黄素对RPE凋亡的诱导作用。 结果 (1)不同浓度的金雀异黄素可以抑制RPE增殖,在25mg/L—100mg/L的范围内呈现剂量效应关系,抑制率为12.0%—64.6%(P<0.05);并随时间的延长,抑制效应增强。嗜银蛋白染色结果:50mg/L金雀异黄素作用12h即有胞核内AgNORs的减少,平均数为2.7(P=0.034),25mg/L金雀异黄素作用24h后,其胞核内AgNORs的数量平均为3.9(P=0.023)。并随着剂量的增加和时间的延长,胞核内AgNORs的数量减少。 (2)不同浓度的金雀异黄素可以诱导RPE凋亡,50mg/L浓度作用24h即有TUNEL阳性的凋亡细胞出现,其凋亡细胞百分数的中位数为7.6%,48h此值为9.8%,72h此值为13.7%;75mg/L浓度作用24h 10.3%,48h 16.4%,72h 23.4%;100mg/L浓度作用24h15.4%,48h 21.2%,72h35.8%。透射电镜观察,50mg/L浓度作用于细胞,胞核内染色体出现边集,但胞膜完整,表现凋亡的早期征象,75mg/L作用可见明显的染色体凝结成块,出现凋亡小体, 第-琴至大甘川士晋值估上 一 呈现典型的凋亡特征。100m叭作用于细胞,除凋亡细胞外,部分 细胞出现胞浆的进行性溶解,有胞膜破坏现象,坏死细胞比例增 多。 结论 不同浓度的金雀异黄素作用于培养人yE,抑制RPE 的增生,有剂量效应关系和时间效应关系,随着剂量增加和时间 的延长,抑制作用越明显。一定浓度的金雀异黄素可以诱导RPE 凋亡的发生,也有一定的量效和时效关系,然而高浓度*) 作用时坏死细胞增多。提示金雀异黄素可以为PW的机理和防治 研究提供新的出路。国内未见相关报道。
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