论文部分内容阅读
RB1是从视网膜母细胞瘤中发现并克隆出的第一个人类肿瘤抑制基因。近年来的研究发现,用RB1转染人类视网膜母细胞瘤,骨肉瘤、肺癌、前列腺癌等细胞系,这些瘤细胞的癌性特征,如停泊非依赖性生长及致瘤性等均受到不同程度的抑制甚至消失。使该基因展示了一种肿瘤治疗的前景。膀胱癌是人类泌尿生殖系最为常见的恶性肿瘤,近年来开展的肿瘤基因治疗的研究,为治疗膀胱癌开辟了新的途径。本实验旨在研究RB1基因对膀胱癌的抑癌效果,探索其在膀胱癌基因治疗中的应用。 将RB1基因组装于以CMV为目的基因起动子、neo基因为筛选标志的PCMU-neo DNA质粒载体。采用电穿孔方法,将重组后的质粒DNA PCMV-neo-RB1,导入RB基因功能失活的膀胱癌细胞系HTB9-5637,用G418筛选转化克隆。经过对转化细胞的研究,发现其生长速率减低,停泊非依赖性生长特性消失,接种裸鼠皮下无致瘤性。流式细胞计检测其S期细胞明显减少。经Northern印迹分析发现Ha-ras癌基因表达受到一定抑制。因此本研究表明RB1基因对人类膀胱癌细胞也具有抑制作用。