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目的:肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factorα,TNF-α)在许多感染性疾病的致病机理中起着重要作用,抑制TNF-α可能有助于感染性疾病的治疗。二甲双胍(metformin,MET)是一种价格经济、安全有效的口服降糖药物,目前MET用于治疗2型糖尿病已有近60年的历史。新近研究发现:MET除具降糖作用外,还可通过激活腺苷活化蛋白激酶(AMP-activedprotein kinase,AMPK)发挥抗炎、抗氧化、抗肿瘤等药理学效应。本文探讨了MET在TNF-α诱导的急性肝损伤的可能保护作用,并探讨了这些效应与AMPK之间的可能关联。方法:雄性BALB/c小鼠(20-25 g)腹腔注射TNF-α(20μg/kg)及D-Gal(700 mg/kg)诱导急性肝损伤。动物实验分两个部分:第一部分小鼠随机分成4组,每组8只,分别为A)溶剂对照组(腹腔注入等体积的溶剂);B)药物对照组(腹腔注射MET,剂量为400 mg/kg,溶于生理盐水);C)模型组(腹腔注射TNF-α/D-Gal);D)处理组(注入MET后30 min再注入TNF-α/D-Gal)。第二部分小鼠随机分成3组,每组8只,分别为A)模型组(腹腔注射TNF-α/D-Gal);B)MET处理组(注入MET后30 min再注入TNF-α/D-Gal);C)AMPK抑制剂阻断组(注入MET后15 min腹腔注射AMPK抑制剂Compand C,剂量为15 mg/kg,随后15 min再注入TNF-α/D-Gal)。各组小鼠在TNF-α/D-Gal注入后6 h,麻醉小鼠摘眼球取血,断颈处死小鼠采集肝脏,检测血浆丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)及门冬氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,AST)水平,观察肝组织病理学形态改变,检测肝组织中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性,检测肝组织中激活型Caspase-3的蛋白含量,并用罗氏TUNEL试剂盒检测肝细胞内的凋亡情况。结果:在第一部分实验研究中,实验数据表明MET可有效减轻TNF-α/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠模型,主要表现在MET处理可显著降低血清中ALT、AST水平,MET处理显著减轻肝组织病理学形态损伤,并且抑制肝组织中Caspase-8、Caspase-9、Caspase-3的活性,MET下调激活型Caspase-3的蛋白水平,同时MET抑制TNF-α/D-Gal诱导的阳性肝细胞的数目,这些结果说明MET可显著减轻肝细胞凋亡及肝组织损伤。在第二部分研究中,本实验使用了AMPK抑制剂Compand C探索MET和AMPK之间的关系,结果发现Compand C可解除MET对TNF-α/D-Gal诱导的肝细胞凋亡和肝组织损伤的保护作用,取消MET对Caspase活性的抑制效应及MET对激活型Caspase-3蛋白水平的下调作用,但血浆中转氨酶ALT的升高降低了部分恢复,这些结果说明AMPK抑制剂Compand C可部分解除MET的保护作用。结论:综合两部分实验数据表明:MET对TNF-α/D-Gal诱导的小鼠急性肝损伤有显著的保护作用,施加AMPK抑制剂Compand C又可部分解除MET的保护效应,表明AMPK可能是其发挥保肝效应的重要靶点,但MET可能也通过AMPK非依赖的途径在TNF-α/D-Gal诱导的急性肝损伤小鼠模型中发挥保护效应,其相关分子机制尚不清楚,仍需进一步研究。