单核细胞增生李斯特菌(以下简称“单增李斯特菌”)是一种重要的人畜共患病致病菌，能引起人和动物脑膜炎、败血症及孕妇流产。在现有的检测方法中，传统方法费时费力，而以单个基因检测单增李斯特菌的单重PCR技术常因基因缺失或基因的特异性不强而导致相应的假阴性与假阳性问题。此外，PCR检测技术会因为靶分子DNA难于降解导致常常将死菌与活菌一同检出，这种由死菌带来的假阳性问题为企业和检验部门带来巨大经济损失；临床检测致病菌也时有死菌存在，产生假阳性同样会给病人和医疗部门带来人身和经济损失。因此提高现有常规PCR检测的特异性，并建立起一种简便、灵敏、快速、特异同时还能区分活菌和死菌的新方法，对于解决假阴性与假阳性问题具有重要意义。　　 本研究首先通过认真筛选和比对，择优利用单增李斯特菌的Iap、PrfA及HlyA三个特异基因作为靶点设计引物构建起三重PCR技术，纯菌的检测灵敏度3×103cfu/ml，对人工污染样品的检测灵敏度至少可以达到3×104 cfu/ml，大大提高了特异性。然后在研究多种条件下mRNA与单增李斯特菌细胞活性的相关性基础上，利用细菌中mRNA在细菌死后很快降解，可以较好地作为活菌的指示标志的特点，首次在国内尝试以mRNA为检测模板，针对单增李斯特菌特异性的溶血素基因HlyA设计引物，建立了灵敏的活菌检测RT—PCR新方法。纯菌的最小检出限为1×104cfu/ml；猪肉样品经过12小时增菌，最小检出限为4.5cfu/g；冷冻虾仁样品增菌16h，最小检出限为4.5×10cfu/g，牛奶样品培养16h，最小检出限可达4.5cfu/ml。结果显示以mRNA为靶分子，建立灵敏的RT—PCR新方法检测样品中活菌是可行的。同时，为快速检测与鉴定食品及临床中单增李斯特菌提供有效的手段，本研究还发明了单增李斯特菌的活体分子检测试剂盒，经过初步的应用取得了较好的成效。经过进一步的完善后，可以推广应用于环境监测、食品卫生监督、商品检验检疫等领域，并能为其它活体食源性和临床致病菌检测提供技术模式。