蚯蚓蛋白凝胶剂的制备及对创伤的治疗研究

来源 :山东大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luzb2009
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本实验从赤子爱胜蚓中分离提取了蚯蚓蛋白,并将其作为凝胶剂主药。蚯蚓蛋白属于蛋白类物质,稳定性受外界影响较大。因此本课题研制出一种固态与液态分开保存的凝胶剂,其中蚯蚓蛋白与凝胶剂基质以固态形式保存,待使用时将液态部分倒入固态部分,凝胶剂快速溶胀。研究该凝胶剂促进大鼠创伤的愈合作用及抗炎作用,并对其相关机理进行了探讨。论文主要内容及主要结论如下:1、蚯蚓蛋白的理化性质和稳定性研究。验证了三批次蚯蚓蛋白的主要理化指标:收率、蛋白溶液pH值、旋光度、蛋白质含量、多糖含量、生物活性,基本一致,无显著性差异,表明,蚯蚓蛋白的提取工艺稳定良好,主要理化指标重复性好。影响因素验证三批次蚯蚓蛋白的稳定性,发现三批次蚯蚓蛋白外观、重量差异、蛋白质含量差异、生物活性差异均无统计学意义,符合要求,为将蚯蚓蛋白制成凝胶剂提供良好的基础。2、凝胶剂的制备和性质研究。处方前研究中筛选出能够在2min内速溶的凝胶剂基质:浓度为0.13%~0.2%的卡波姆940加水稀释溶胀过夜后,-20℃保存24小时,冷冻冻干机冻干后,加一定比例的三乙醇胺可以达到速溶效果,电镜扫描验证卡波姆940冻干后空间结构改变,推测是卡波姆溶胀速度变快的主要原因。通过响应曲面法筛选出蚯蚓蛋白凝胶剂的处方,并进行凝胶剂的流变学性质等基本性质和初步稳定性检测。其处方组成为蚯蚓蛋白干粉(主药)0.1g,卡波姆940(凝胶基质)0.3g,三乙醇胺(pH调节剂)3.72g,甘油(保湿剂)12.5g,尼泊金乙酯(防腐剂)0.01g,甘露醇(蛋白冻干时保护剂)0.0001g,蒸馏水(溶剂)84mL。3、将蚯蚓蛋白凝胶剂应用于大鼠全层皮肤切除模型和线性切割模型,研究其生化指标、形态学和组织病理学变化。结果表明:蚯蚓蛋白凝胶剂高剂量组可以通过提高创面羟脯氨酸、髓过氧化物酶、丙二醛含量来提高胶原蛋白、成纤维细胞,增加毛细血管数目,减少自由基攻击;通过降低创伤面中炎性因子TNF-α水平,提高炎症后反应因子IL-10的含量,减轻炎症反应,从而促进创伤面愈合,缩短创伤愈合时间。本课题从蚯蚓干体中分离提取了具有促进创伤愈合作用的蛋白成分,相比于鲜活蚯蚓具有储藏、运输方便等优势;制备了蚯蚓蛋白速溶凝胶剂,并将速溶凝胶剂应用于大鼠创伤模型;该凝胶剂制备方法重复性好、稳定性高,为凝胶剂的医药生产提供了依据;对蚯蚓主要成分开发成外用创伤制剂的研究提供了一定的理论依据,扩展了蚯蚓的药用领域。
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