米毛盘菌YM218胞外多糖深层发酵及抗肿瘤活性研究

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真菌胞外多糖是真菌在细胞内合成后分泌到胞外的一类多糖,科学实验表明,真菌胞外多糖具有很强烈的抗肿瘤活性,对癌细胞有很强的抑制力。由于胞外多糖具有产生量大、易于与菌体分离等特点,因而可通过深层发酵实现工业化生产。本文对Lachnumsp.YM218胞外多糖的发酵条件及提取工艺进行了研究,并初步探索了该多糖的抗肿瘤生物活性。   以获取较高胞外多糖产量为目的,通过正交试验,确定液体发酵最佳培养基组成为:葡萄糖30g/L、酵母膏12.5g/L、Ca(OH)20.05g/L。最佳液体培养条件为:起始pH值6.5、培养温度28℃、摇床转速210r/min。在该培养条件下,YM218胞外多糖发酵周期由12d缩短为10d;胞外多糖最高产量由优化前的4.247g/L提高到9.917g/L,相对于优化前提高了133.51%。   在摇瓶发酵的基础上,利用5L发酵罐进行深层发酵试验,确定5L发酵罐的最优发酵条件为:装液系数为0.5,接种量10%,转速230r/min,通气量3L/min。在此培养条件下,胞外多糖的最高产量由优化前11.756g/L提高到13.358g/L,比优化前提高了13.63%。   以获取较高的胞外多糖活性为目的,确定YM218胞外多糖的最佳提工艺为:将离心去除菌丝体的发酵液调至中性(pH=7),离心去除沉淀,55℃浓缩至原体积的1/4,冷却后加入无水乙醇溶液至终浓度75%,4℃静置24h,5000r/min离心15min,收集沉淀,沉淀经无水乙醇,乙醚,丙酮反复洗涤后,低温真空干燥,得胞外粗多糖。   通过测定YM218胞外多糖抗肿瘤活性来研究其生物活性,研究结果表明:50%醇沉粗多糖的抗肿瘤活性最好,且抑制作用具有剂量依赖性,浓度为0.4mg/mL时,对Hep-2细胞增殖的抑制率达到84.46%,IC50为0.13mg/mL。
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