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第一部分CD147、MMP-2、TIMP-2与P-gp在胆囊癌中的表达及意义目的研究胆囊癌组织中CD147、TIMP-2、MMP-2和P-gp的表达水平,探讨CD147分子与TIMP-2、MMP-2和P-gp在胆囊癌细胞中表达的相关性及其在胆囊癌临床病理学中的意义。方法用SP免疫组织化学法检测60例胆囊癌组织(实验组)及40例慢性胆囊炎组织(实验对照组)石蜡切片标本中CD147、TIMP-2、MMP-2和P-gp的蛋白表达水平。结果胆囊癌组织中CD147、MMP-2、P-gp的阳性表达率(66.67%、75%、76.67%),均分别明显高于慢性胆囊炎组(20.0%、10.0%、7.5%),差异有显著性(均P<0.01)；胆囊癌组织中TIMP-2阳性表达率(40.0%)则低于慢性胆囊炎组(90%),差异有显著性(P<0.01); CD147、TIMP-2、MMP-2和P-gp的表达情况与胆囊癌的分化程度、Nevin分期、肿瘤有无转移有密切关系(P<0.01)；在胆囊癌组织中,CD147与MMP-2以及P-gp的表达水平存在着正相关(CD147 vs MMP-2, r=0.277, P=0.015; CD147 vs P-gp, r=0.464, P=0.026), TIMP-2与MMP-2的表达评分之间存在着负相关(r=-0.583,P=0.000)。结论CD147、MMP-2和P-gp的高表达可能共同促进了胆囊癌的浸润、转移；TIMP-2可能通过抑制MMP-2的活性而抑制胆囊癌的浸润和转移；CD147可能通过上调MMP-2及P-gp的表达,促进胆囊癌的浸润、转移以及自发性多药耐药的发生。第二部分CD147反义RNA表达质粒载体的构建及克隆鉴定目的构建CD147反义RNA表达质粒载体,用CD147反义RNA特异性封闭人胆囊癌GBC-SD细胞表面CD147的表达。方法用DNA重组技术将人CD147基因反向克隆到真核表达质粒载体PCI-neo中,构建成CD 147反义RNA表达载体PCI-CD147。通过脂质体介导转染GBC-SD细胞,经G418筛选后获得的克隆,用western-blot方法检测CD147蛋白表达水平的变化。结果CD147反义RNA表达质粒载体,经限制性酶切及插入片段的序列分析,鉴定目的基因插入正确。Western-Blot检测结果显示,与未转染组及转染空载体组细胞相比,转染组GBC-SD/PCI-CD147细胞中CD147的表达明显下降(P<0.05)。结论成功构建了CD147反义RNA表达质粒载体PCI-CD147。CD147反义RNA能有效抑制胆囊癌细胞GBC-SD中CD147的表达。此实验结果为进一步研究CD147在胆囊癌细胞浸润和转移中的分子作用机制以及为胆囊癌的基因治疗研究奠定了基础。第三部分CD147反义RNA对人胆囊癌细胞系GBC-SD的体外侵袭力及多药耐药性的影响目的研究CD147反义RNA对胆囊癌细胞GBC-SD的侵袭力及多药耐药性的影响。方法将前期构建的重组质粒PCI-CD147稳定转染至胆囊癌细胞GBC-SD,用半定量RT-PCR、Western-blot方法检测实验组GBC-SD/PCI-CD147(CD147反义核酸转染的胆囊癌细胞)和实验对照组GBC-SD(未转染PCI-CD147的胆囊癌细胞)、空白对照组GBC-SD/PCI-neo (PCI-neo空载体转染的胆囊癌细胞)中CD147、MMP-2、TIMP-2、P-gp的含量；明胶酶谱法分析各组细胞产生MMP-2和MMP-9的含量；人工基底膜侵袭实验及过河实验检测各组细胞的侵袭和迁移运动能力；MTT法测定三组细胞的生长情况；流式细胞仪检测三组细胞多种化疗药物处理后细胞周期的分布及细胞凋亡率。结果CD147反义核酸对GBC-SD细胞的生长无影响；GBC-SD/PCI-CD147组与GBC-SD组、GBC-SD/PCI-neo组相比,MMP-2和MMP-9的分泌量显著降低,基底膜侵袭实验中穿膜细胞数目显著减少,细胞的过河时间显著延长,多种化疗药物的细胞毒及促凋亡作用明显增强,差异均有显著性(均P<0.01)。结论CD147反义核酸能有效抑制胆囊癌GBC-SD细胞的侵袭力,能逆转肿瘤细胞的多药耐药性,因而,CD147有可能成为胆囊癌治疗的药物靶点。