SPRYl在肾透明细胞癌中的表达及功能研究

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目的:SPRY1是一种Ras/MAP激酶信号通路中的抑制蛋白,调节多种细胞功能,如凋亡、增殖、分化等.众多研究表明SPRY1在肿瘤组织中的表达水平变化可能起着促进或抑制肿瘤发生及进展.许多肿瘤相关研究表明,在肿瘤组织中,SPRYl的表达是呈现出下降趋势,例如卵巢癌、乳腺癌、肝癌、结直肠癌、肺癌、前列腺癌中等,证明了在肿瘤发生过程中起到了抑癌基因的作用.我们通过查阅文献,尚未发现关于SPRY1在肾透明细胞癌中的相关研究报道.本课题皆在研究SPRY1在肾透明细胞癌的癌组织和相应的癌旁组织中的表达情况,通过体外实验探索SPRY1在肾透明细胞癌发生过程中的作用,研究SPRY1基因对肾透明细胞癌细胞的周期、增殖以及迁移能力的影响,进而为探索肾癌发生机制研究以及新的治疗方案提供新的思路.  方法:1、使用Real-time PCR检测52例肾透明细胞癌癌组织中及其相应的癌旁组织中SPRY1的mRNA表达水平,利用western-blot和免疫组织化学实验检测该基因SPRY1的蛋白表达水平;2、通过进行Western-blot以及实时定量PCR检测肾癌细胞株Caik-2、786-O、OS-RC-2、769-P中以及HK2细胞株中SPRY1基因表达水平;3、之后我们构建了过表达SPRY1的慢病毒质粒,培育成功了稳定表达SPRY1基因的稳转769-P和786-O肾透明细胞癌细胞株;4、利用划痕实验、MTS实验以及细胞周期实验分别检测了过表达SPRY1基因后对细胞迁移能力、增殖能力以及周期的影响.  结果:1、在肾透明细胞癌中,癌组织中的SPRY1mRNA水平是明显下降的(P<0.01),该基因在组织蛋白水平上,与mRNA表现出的下调趋势一致;2、与正常肾小管上皮细胞HK2相比较,在肾透明细胞癌细胞株Caik-2、786-O、OS-RC-2、769-P中,SPRY1的mRNA及蛋白表达水平与组织中的表达趋势一致(P值均<0.05),也是下调的;3、我们成功构建并培育出了过表达SPRY1的786-O和769-P肾透明细胞癌细胞株;4、通过细胞体外实验,过表达SPRY1的肾癌细胞株增殖及迁移能力下降显著.  结论:在肾透明细胞癌的发生进展过程中,SPRY1的低表达可能起到了促进该肿瘤发生的作用.
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