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近年来,猫上呼吸道疾病已经成为诱发幼猫发病和死亡的一大重要原因,感染通常由两种或多种病原引起,常见病原有猫疱疹病毒、猫杯状病毒、衣原体、波氏杆菌、支原体、呼肠孤病毒等。猫疱疹病毒（Feline herpesvirus-1,FHV-1）和猫杯状病毒（Feline calicivirus,FCV）是大多数猫上呼吸道感染的主要原因,且FHV-1常与FCV混合感染,给FHV-1的分离带来极大的困难。FHV-1引起的猫科动物上呼吸道急性高度接触性传染病,称为猫传染性鼻气管炎,临床以喷嚏、角膜结膜炎、嗜睡及精神沉郁等为主要特征。该病发病率极高,成年猫和幼猫均易感,严重威胁着猫科类动物的健康。本研究采集哈尔滨市某猫舍上呼吸道感染的猫眼鼻拭子,初步确诊为FHV-1和FCV混合感染。利用CRFK细胞对采集的拭子进行病毒分离培养,前两代细胞培养物核酸检测结果为FHV-1和FCV共存,第三代开始只有FCV,由此分离出FCV,命名为HRB23株。制备FCV HRB23株的鼠源多克隆抗体,中和混合培养物中的FCV,从而分离出FHV-1,命名为HRB2019株。通过病毒粒子形态学观察、间接免疫荧光试验和基因序列分析等方法对HRB2019株进行鉴定,并进行病毒体外生长动力学研究。结果显示,HRB2019株可在CRFK细胞上产生典型病变,并测得其病毒滴度为1×108.43TCID50/m L;电镜下可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的病毒粒子;分离株可与FHV-1阳性血清结合,出现特异性荧光;扩增分离株的g D基因,核酸序列与Gen Bank上传的国内外流行株同源性极高。病毒一步生长曲线表明HRB2019株感染细胞12 h后开始复制增殖,12 h～36 h为快速增殖期,48 h～72 h进入增殖平台期且滴度达到高峰,84 h病毒滴度开始下降。为进一步明确HRB2019株对猫的致病性,本研究将HRB2019株以500μL/只(1×107.43TCID50/m L)经滴鼻和点眼接种健康中华田园猫。结果显示,感染组猫急性感染期体重明显下降,体温明显升高;同时出现喷嚏、结膜炎、呼吸困难等特征性临床症状,未有死亡现象出现。为了解HRB2019株在猫体内的复制动态,本研究建立了FHV-1 SYBR Green I荧光定量PCR方法,以检测HRB2019株在各组织部位中病毒载量变化情况。结果显示,感染组猫从攻毒后第1日起,即可在眼鼻拭子中检测到FHV-1,第6～7天排毒量达到最高峰,持续排毒到第16天;病毒血症检测结果显示,从攻毒后第2天出现病毒血症,第4天达到峰值,并持续到第16天,后以低水平持续存在。结合对眼鼻拭子及血液中病毒的检测,发现家猫感染病毒后第4～7天体内病毒载量达到峰值,第8天开始下降,并持续排毒到实验结束。组织病毒载量测定结果显示,感染后16天,在感染组猫的喉、气管、肺脏、生殖器官中均能检测到FHV-1,证明FHV-1与人疱疹病毒有类似的感染特征,可在生殖器官潜伏。研究显示,猫疱疹病毒HRB2019株是一株对家猫致病性较强的毒株。综上所述,本研究成功从FCV与FHV-1混合感染的病料中分离出一株猫疱疹病毒毒株,命名为HRB2019株,并证实了该毒株对中华田园猫具有致病性,为FHV-1的诊断防控及疫苗的研究奠定了基础。