【摘 要】
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目的:研究fam73a基因缺失对听觉功能的影响研究方法:一、通过TALEN技术构建fam73a基因全身敲除小鼠模型。二、通过RT-PCR、免疫组化观察fam73a在内耳中的定位及时空表达。三
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目的:研究fam73a基因缺失对听觉功能的影响研究方法:一、通过TALEN技术构建fam73a基因全身敲除小鼠模型。二、通过RT-PCR、免疫组化观察fam73a在内耳中的定位及时空表达。三、通过ABR检测fam73a敲除小鼠听力学水平的改变。四、通过免疫组化观察小鼠内耳毛细胞的形态学变化。结果:一、提取P1-P2左右的野生型小鼠的耳蜗组织、心脏组织、脑组织、扁桃体的RNA,结果发现fam73a在内耳中有表达。取P1野生型小鼠的颞骨进行冰冻切片,用fam73a抗体和毛细胞的另一个标记物myosin7a共同进行免疫荧光染色,结果发现在内耳中fam73a与毛细胞共定位。同时取P1的野生型小鼠耳蜗基底膜做铺片染色,使用fam73a抗体,毛细胞标记物Myosin7a共同染色,发现fam73a与毛细胞共定位。我的实验首次证明了 fam73a在小鼠耳蜗内耳中存在,并且表达在内耳毛细胞。二、首先我们通过TALEN技术建立了 fam73a基因全身敲除的小鼠模型:该小鼠模型来源于浙大靳津教授实验室。并通过测序、PCR、Western Blot等实验方法验证该基因敲除成功。为了探究fam73a基因的缺失对听力的影响,取4只P30的fam73a敲除小鼠和同年龄3只野生型小鼠,用戊巴比妥钠麻醉之后测ABR,并对所得结果进行分析,发现fam73a敲除之后会导致小鼠出现听力损失,解剖基底膜用毛细胞的标记物myosin7a进行免疫荧光染色,我们发现在基底膜的底圈发生了毛细胞的点状缺失,这种缺失以外毛细胞为主,对这一缺失现象进行统计学分析,结果发现在P30时fam73a敲除小鼠内耳毛细胞在底圈有毛细胞的缺失,下一步为了继续研究fam73a基因的缺失对听力的影响,取5只P60的fam73a敲除小鼠和同年龄的4只野生型小鼠,用戊巴比妥钠麻醉之后测ABR,并对所得结果进行分析,发现fam73a敲除之后会导致小鼠出现非常严重的听力损失,解剖基底膜用毛细胞的标记物myosin7a进行免疫荧光染色,我们发现基底膜从顶圈到底圈发生了毛细胞的点状缺失,这种缺失以外毛细胞为主,对这一缺失现象进行统计学分析,结果发现到P60时fam73a敲除小鼠内耳毛细胞缺失从顶圈到底圈呈递增的趋势。结论:fam73a基因敲除后成年小鼠听力损失
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