PC-1特异性区段分析与功能研究及红麻油脂CLA抗癌功能初步探讨

来源 :福建农林大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yigenjin2009
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PC-1基因定位于前列腺癌最常发生扩增的染色体8q21.1基因座,是周建光研究员发现并克隆的前列腺癌相关基因,其产物属于TPD52蛋白家族,N端46个氨基酸是其所特有。PC-1是一个雄激素应答基因,在AR(androgen,receptor)阳性与阴性的前列腺癌细胞系中均有表达,并随着临床分级和细胞恶性程度的增加而表达升高。前期研究表明,PC-1具有转录因子的特征并能促进前列腺癌细胞的增殖和雄激素非依赖的生长。红麻油脂是以亚油酸为主要成分的、安全的使用油脂,经精炼、催化后其主要成分可转变为CLA。CLA在动物和植物界中广泛存在,是必需脂肪酸亚油酸酸9 ,12 - 18∶2 (LA)衍生的共轭双烯酸,对人的生理功能具有重要意义。国内外大量的研究表明,CLA对多种肿瘤具有明显的抑制作用。鉴于此,我们运用了一系列实验方法,对PC-1的特异性片段和红麻油脂CLA的抗癌功能进行研究,并取得以下结果:1、通过重叠PCR等分子克隆技术构建不同的融合绿色荧光蛋白的PC-1截短体、突变体的pEGFP载体,让其在前列腺癌细胞系LNCaP中表达,荧光显微镜下发现,PC-1定位细胞质的大小极限应该在111~114个氨基酸残基左右,同时PC-1分子的103~114位氨基酸对其亚细胞定位十分重要,但不是岀核序列。2、运用同源重组技术,经过穿梭载体构建、酶切线性化、体外细菌重组等步骤构建了pAd-EGFP,pAd-EGFP-PC11-46、pAd-EGFP-PC-147-224、pAd-EGFP-PC-1等重组腺病毒载体,为研究PC-1片段功能提供了先决条件。3、平板克隆和westerblot实验证明,CLA在体外具有抑制癌细胞生长的能力,并且能够降低前列腺癌细胞C4-2中的AKT磷酸化水平。本研究中,我们发现了对PC-1亚细胞定位有重要影响的氨基酸序列和成功的构建了用于PC-1片段功能研究的腺病毒载体,为今后PC-1的研究积累基础。同时,我们发现红麻油脂CLA在体外抑制多种癌细胞的生长,提示其在药用或保健食品方面的潜在价值。
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