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目的:女性在更年期后体重显著增加,形成以腹部为中心的肥胖。更年期肥胖会对女性身体及心理健康带来非常恶劣的影响,可诱发、加重冠心病、高血压、高血脂、2型糖尿病、脑卒中、癌症等重大疾病。因此,对更年期肥胖的防治不容忽视。雌激素水平下降是更年期肥胖的重要原因,但雌激素替代疗法存在诱发癌症的风险,临床上防治更年期肥胖需要新靶点、新思路。能量代谢失衡是肥胖产生的重要原因之一,研究发现更年期女性雌激素分泌水平下降可导致机体摄入的能量增多,机体消耗的能量减少,形成能量代谢失衡,最终导致肥胖。棕色脂肪(brown adipose tissue,BAT)消耗能量产热是调节能量代谢平衡的途径之一。在卵巢切除大鼠模型中发现大鼠肩胛区棕色脂肪产热功能下降。因此,调节棕色脂肪产热功能可能成为防治更年期肥胖的新切入点之一。5’单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’ monophosphate activated protein kinase,AMPK)是一种集多种功能于一体的能量感受器和代谢调节因子,能够通过加强外周组织的代谢来调节全身的能量代谢平衡,并能促进线粒体的合成。肥胖患者及其模型、衰老模型的外周组织中,AMPK的活性显著下降。中医学认为天癸竭、肾气虚是更年期肥胖的重要原因,与能量代谢失衡相关的疲劳乏力、畏寒、少动等症状与中医范畴中的肾阳虚诸症相似,棕色脂肪产热功能可能与肾阳密切相关。因此,补肾温阳是中医治疗更年期肥胖的第一要务。补肾方剂二仙汤有温肾阳、补肾精、泻相火、调冲任之功,临床上对于多种更年期相关疾病有良好的疗效。前期研究表明,二仙汤干预可提高更年期大鼠的胰岛素敏感性,达到有效干预更年期相关肥胖的目的。由于棕色脂肪产热功能下降是肥胖原因之一,本研究基于二仙汤通过补肾气、温肾阳调节能量代谢平衡,改善卵巢切除大鼠棕色脂肪产热功能来干预更年期肥胖的假说,观察二仙汤对卵巢切除大鼠棕色脂肪产热相关蛋白表达的影响及AMPK在其中的作用。淫羊蕾苷是二仙汤君药淫羊藿的主要成分,其减少卵巢切除大鼠体质量增加、改善卵巢切除大鼠脂质代谢紊乱的作用与二仙汤相似。因此,在细胞水平,我们选用淫羊藿苷作为干预药物验证本假说。方法:1.二仙汤对卵巢切除大鼠棕色脂肪产热相关蛋白及AMPK磷酸化的影响。40只雌性SD大鼠随机平均分为假手术组(SHAM,等量生理盐水灌胃)、卵巢切除模型组(OVX,等量生理盐水灌胃)、二仙汤低剂量组(EXDL,15mg/kg)、二仙汤高剂量组(EXDH,60mg/kg)、雌激素组(E,0.01mg/kg)等五组,卵巢切除术后第7天分别给予相应的药液连续灌胃给药14周。称取体质量、腹腔内脂肪质量;取血清检测血脂四项;取各组大鼠肩胛区棕色脂肪,H&E染色观察各组棕色脂肪形态学变化,Western-blot及qPCR检测各组棕色脂肪产热相关蛋白(UCP-1、PGC-1α的蛋白及其mRNA表达水平;Western-blot检测各组棕色脂肪AMPK磷酸化水平。2.淫羊蕾苷对棕色脂肪细胞产热相关蛋白的影响及AMPK通路在其中的作用。培养3T3-L1脂肪前体细胞并诱导其分化为棕色脂肪细胞,按不同加药浓度分为空白对照组(CON,0μg/mL)、淫羊蕾苷低剂量组(ICAL,25μg/mL)、淫羊藿苷高剂量组(ICAH,50 μg/mL),加药作用24 h后,应用Western-blot及qPCR检测各组棕色脂肪细胞产热相关蛋白(UCP-1、PGC-1α)的蛋白及mRNA相对水平;加药作用15 min后,Western-blot检测各组棕色脂肪细胞AMPK磷酸化情况;设阻断组(含10 μmol/L Compound C的培养液预处理30 min后再予含ICA 50 μg/mL培养液干预24 h)检测UCP-1的蛋白及mRNA水平表达变化。结果:1.卵巢切除模型组大鼠体质量、腹腔内脂肪质量与假手术组大鼠相比显著增加;卵巢切除模型组大鼠血清总胆固醇水平较假手术组大鼠显著升高;二仙汤治疗后可降低卵巢切除大鼠体质量及腹腔内脂肪质量,并能降低卵巢切除大鼠血清总胆固醇水平;卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA的表达水平与AMPK磷酸化水平较假手术组降低;二仙汤治疗后可提高卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA的表达水平与AMPK磷酸化水平。2.淫羊蕾苷组棕色脂肪细胞UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA的表达水平、AMPK磷酸化水平与空白对照组相比升高;AMPK阻断组与淫羊藿苷组相比,UCP-1蛋白及其mRNA的表达的水平下降。结论:1.二仙汤可能通过上调卵巢切除大鼠肩胛区棕色脂肪中产热相关蛋白UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA表达水平,来降低卵巢切除大鼠的体质量、腹腔内脂肪质量及血清中总胆固醇的水平,其机制可能是二仙汤能激活棕色脂肪AMPK通路。2.淫羊蕾苷可上调棕色脂肪细胞中产热相关蛋白UCP-1及PGC-1α的蛋白及其mRNA表达水平,这可能与其激活AMPK通路有关。