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本试验以猪肠上皮细胞IPEC-1为实验模型，研究了三种锌源（甘氨酸锌、蛋氨酸锌、硫酸锌）对IPEC-1锌吸收转运蛋白基因水平的影响。并通过RNA干扰，研究ZIP4在肠道锌转运过程中发挥的作用，进一步探讨氨基酸螯合锌在猪肠道的可能吸收模式。试验分以下两部分进行: 试验一 不同锌源和锌水平对IPEC-1锌吸收转运蛋白基因表达的影响 1.不同锌源对猪肠上皮细胞IPEC-1细胞增殖的影响 试验以IPEC-1为研究对象，分别在IPEC-1细胞培养液中添加锌浓度为0、50、100、150、200μmol/L的三种锌源（甘氨酸锌、蛋氨酸锌、硫酸锌）分别培养6h、12h、24 h，MTT法测定细胞增殖变化。结果表明:在作用6h、12h或24 h后，高剂量的三种锌源均显著抑制猪肠上皮细胞的生长（P＜0.05），其中以6h时细胞活性值的下降幅度最小，但高剂量（100μmol/L以上）同浓度的有机锌对IPEC-1细胞的损伤小于无机锌。同时甘氨酸锌、蛋氨酸锌、硫酸锌组IPEC-1细胞活性具有明显的剂量依赖效应，随着锌浓度的增加细胞活性下降，并且在锌添加水平≥100μmnol/L时下降明显。因此本试验选择50μmol/L、6h作为最佳处理浓度和时间用于后期试验。 2.不同锌源对猪肠上皮细胞IPEC-1锌吸收转运蛋白基因水平的影响 选用锌浓度为50μmol/L的三种锌源（甘氨酸锌、蛋氨酸锌、硫酸锌）或锌浓度为0、50、100、200μmol/L的甘氨酸锌分别作用于IPEC-1细胞，处理6h。Real-time PCR法测定MT1、DMT1、ZIP4、ZIP5、ZnT1、ZnT2 mRNA表达水平，以β-actin mRNA水平作为内参对照。结果表明:三种锌源均可快速有效改善细胞锌状态。添加锌可显著上调IPEC-1细胞MT1、ZIP5、ZnT1和ZnT2 mRNA表达水平（P＜0.05），下调ZIP4 mRNA表达水平(P＜0.05)，但三种锌源处理组组间差异显著。与对照组相比，甘氨酸锌组能较显著地上调MT1、DMT1、ZnT1mRNA表达水平（P＜0.05）;硫酸锌和蛋氨酸锌组ZnT2 mRNA表达水平显著增加（P＜0.05），DMT1、ZIP4 mRNA表达水平均显著下降（P＜0.05）;硫酸锌组ZIP5 mRNA表达水平显著增加(P＜0.05)，其他各组差异不显著（P＞0.05）。同时添加不同水平的甘氨酸锌处理IPEC-1细胞6h后，MT1、ZIP5、ZnT1、ZnT2mRNA表达水平显著增加(P＜0.05)，ZIP4 mRNA表达水平显著下降（P＜0.05）。添加锌浓度为50μmol/L的甘氨酸锌可显著增加DMT1 mRNA表达水平（P＜0.05），而高浓度锌添加量（100、200μmol/L）均显著降低其表达水平(P＜0.05)。 试验二 ZIP4-siRNA转染对IPEC-1 MT1、DMT1 mRNA表达及细胞锌吸收率的影响 以猪肠上皮细胞IPEC-1为研究对象，设计合成针对ZIP4基因的siRNA，经LipofectamineTM2000脂质体转染IPEC-1细胞24 h、48 h，RT-PCR法检测ZIP4mRNA水平表达的变化，并用MTT法检测IPEC-1细胞增殖的变化;添加50μmol/L硫酸锌、甘氨酸锌、蛋氨酸锌分别处理ZIP4-siRNA转染细胞6h，RT-PCR法检测MT1、DMT1 mRNA表达变化，ICP-MS法检测IPEC-1细胞锌吸收率的变化。研究结果表明: (1)4对ZIP4-siRNA序列转染IPEC-1细胞24 h或48 h可有效抑制ZIP4 mRNA表达，其中ZIP4-siRNA1序列抑制效果更明显。与空白对照组相比，24 hZIP4-siRNA1抑制率达到64.60％;48 h干扰效果更加突出，抑制率达到78.43％。同时MTT结果显示，ZIP4-siRNA1转染IPEC-1细胞24 h或48 h对细胞MTT OD值无显著影响（P＞0.05）。因此，本试验选取ZIP4-siRNA1和24 h分别作为最佳特异性RNA干扰序列和干扰时间。 (2)不同锌源作用IPEC-1转染细胞6h发现:添加硫酸锌和甘氨酸锌的转染组MT1 mRNA表达水平较阴性对照组分别下降了16.94％(P＜0.05)、33.62％（P＜0.05），但添加蛋氨酸锌的转染组MT1 mRNA表达水平与阴性对照组差异不显著（P＞0.05）。与阴性对照组相比，添加硫酸锌的转染组DMT1 mRNA表达水平提高了29.61％（P＞0.05），而添加甘氨酸锌和蛋氨酸锌的转染组DMT1 mRNA表达水平分别下降了29.85％(P＜0.05)、26.44％(P＜0.05)。添加硫酸锌作用6h后，ZIP4-siRNA转染组IPEC-1细胞锌吸收率较阴性对照组下降了73.33％（P＜0.05），但ZIP4-siRNA转染前后对甘氨酸锌和蛋氨酸锌组细胞锌吸收率影响不显著（P＞0.05）。 综上所述，添加甘氨酸锌、蛋氨酸锌或硫酸锌均可快速有效改善细胞锌状态;高剂量的三种锌源均可抑制猪肠上皮细胞增殖，但高剂量（锌浓度≥100μmol/L）同浓度的有机锌对猪肠上皮细胞的损伤小于无机锌;三种锌源对肠道锌吸收转运蛋白基因的表达存在差异，甘氨酸锌组能够较显著地上调MT1、DMT1、ZnT1mRNA表达水平，硫酸锌和蛋氨酸锌组ZnT2 mRNA表达水平显著增加，DMT1、ZIP4 mRNA表达均显著下降，硫酸锌组ZIP5 mRNA表达水平显著高于其他各组。添加不同水平的甘氨酸锌可显著上调MT1、ZIP5、ZnT1、ZnT2 mRNA表达水平，下调ZIP4 mRNA表达水平。RNAi实验进一步证实硫酸锌在肠道的吸收主要依赖ZIP4，甘氨酸锌部分依赖ZIP4，蛋氨酸锌基本不依赖ZIP4。推测有机锌可能与无机锌的吸收转运方式不同，在肠细胞顶膜侧可能存在其他吸收通路，对此有待进一步深入研究。