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【目的】1.近年,三结构域家族（TRIM）家族部分成员由于其抗病毒特性受到极大关注;单核苷酸多态性（SNP）是个体疾病易感性、药物反应差异的重要遗传学基础,本研究旨在寻找TRIM家族基因中影响CHB患者IFN-α疗效差异的SNP位点,确定其对IFN-α疗效的预测价值,为CHB患者的个体化治疗提供依据。2.初步探讨TRIM家族基因在IFN-α抗HBV中的作用,为探明IFN-α抗HBV作用机制提供理论依据。【方法】1.收集2015年9月至2018年9月期间福建医科大学附属第一医院肝病中心收住及门诊使用IFN-α治疗（包括IFN-α或PegIFNα单药治疗、PegIFNα和核苷类药物联合或序贯治疗,以下统称IFN-α治疗）的124例HBeAg阳性CHB患者的全血和血清标本,根据48周疗程结束时的疗效分为完全应答（CR）组[（HBV DNA<500 IU/ml,HBeAg转阴或发生血清学转化,和（或）HBsAg清除）]和应答不佳（SR）组[(HBV DNA下降≥1 log100 IU/ml但仍大于500 IU/ml,HBeAg未清除)]。采用离心柱法提取CHB患者全血DNA,通过Infinium?Asian Screening Array高通量芯片进行SNP分型。运用化学发光微粒子免疫分析法（CMIA）定量检测HBV血清标志物、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测HBV DNA载量,速率法检测ALT等指标。统计学分析采用正态性检验、t检验、χ2检验等。2.通过实时荧光定量PCR比较CR组和SR组CHB患者的全血中TRIM mRNA表达情况差异。同时验证通过芯片分析出的TRIM SNP位点不同基因型的TRIM mRNA表达情况,分析不同基因型与IFN-α疗效相关实验室指标之间的相关性。3.用103 IU/ml IFN-α刺激HepG2.2.15,检测不同时间点其TRIM mRNA的表达水平;利用Lipo8000转染试剂盒将pHBV-1.2表达载体和pREP10空白载体分别转染添加103 IU/ml IFN-α刺激后的HepG2细胞,采用RT-qPCR和Westernblot检测TRIM mRNA/蛋白的表达水平。【结果】1.TRIM基因多态性与HBeAg阳性CHB患者IFN-α疗效的关系对124例样本用Asian Screening Array检测出483500个位点。通过卡方检验和数据的多重检验校正,得到P<0.05的位点23672个,P<0.01的位点4381个（基因1265个）,P<10-5的位点51个（基因20个）。其中TRIM家族基因P<0.05涉及11个基因48个SNP位点,通过查阅文献并以最小等位基因频率（MAF）≥5%的选择标准,最终确定了6个最可能与CHB患者IFN-α疗效有关系的SNP位点。结果显示TRIM22 rs10838543等位基因A、AA基因型和TRIM31 rs2523992等位基因A、AA基因型在CR组和SR组之间的分布差异具有统计学意义,与应答不佳的发生正相关（P<0.05）;TRIM15 rs2074477等位基因G、GG基因型,TRIM26rs12175655等位基因G、GG基因型和TRIM39 rs2240058等位基因A、AA基因型在CR组和SR组之间的分布差异具有统计学意义,与应答的发生正相关（P<0.05）;TRIM38 rs62394537等位基因G在CR组和SR组之间的分布差异具有统计学意义,但其基因型对IFN-α的疗效无预测价值。TRIM15 rs2074477 GG基因型、TRIM39 rs2240058 AA基因型与e抗原阴转正相关（P<0.05）,TRIM22 rs10838543 AA基因型和TRIM31 rs2523992 AA基因型与e抗原阴转负相关（P<0.05）。TRIM26 rs12175655 GG基因型以及TRIM38rs62394537 GG基因型与e抗原的血清学转换无关（P>0.05）。2.TRIM基因多态性与TRIM表达的关系实时荧光定量PCR结果显示TRIM22 rs10838543 AA基因型的CHB患者外周血中TRIM22的表达显著低于AG+GG基因型,而其他TRIM 15/26/31/38/39SNPs基因型与相应的TRIM基因mRNA表达量无关,差异没有统计学意义。另外,相比于SR组,CR组仅有TRIM22 mRNA表达量明显增高。3.IFN-α的疗效预测指标鉴于TRIM SNPs与IFN-α疗效的关联,结合目前常规抗病毒实验室指标,发现治疗第12周HBeAg水平、HBsAg浓度在CR组和SR组之间分布具有统计学差异,进一步通过ROC曲线分析第12周HBeAg水平、HBsAg浓度以及TRIM SNPs基因型对IFN-α疗效的预测价值,12周HBeAg水平和HBsAg浓度曲线下面积（AUC）分别为0.761（P=0.001）和0.646（P=0.019）,第12周HBsAg<3.20log100 IU/ml、HBeAg<2.57 log100 S/CO者更有机会在治疗48周时获得完全应答。另外TRIM15 rs2074477（GG）、TRIM22 rs10838543（AA）、TRIM26 rs12175655（GG）、TRIM31 rs2523992（AA）、TRIM39 rs224005（AA）以及五者联合检测的AUC分别为0.627（P=0.03）、0.680（P=0.002）、0.589（P=0.13）、0.606（P=0.07）、0.621（P=0.038）、0.648（P=0.011）,其中TRIM22的AUC最大为0.680,差异有统计学意义。利用logistics回归分析TRIM22、12周HBeAg浓度、12周HBsAg浓度两两联合以及三者联合的预测价值,其中TRIM22和12周HBeAg浓度两两联合的AUC最大为0.807[(P<0.0001,95%CI（0.718-0.878）],明显优于其他指标联合和单个指标的预测价值。4.TRIM家族基因表达对IFN-α抗HBV的影响HepG2.2.15和HepG2细胞中TRIM22基础表达值较低,体外应用103 IU/ml IFN-α刺激后细胞内TRIM22 mRNA的表达显著升高,而TRIM15、TRIM26、TRIM31、TRIM38和TRIM39的表达则无明显变化。实时荧光定量PCR和Western-Blot的结果显示,相比于转染pREP10空白载体,转染pHBV-1.2质粒的103 IU/ml IFN-α刺激后HepG2细胞中TRIM22 mRNA和蛋白的表达量都降低。这一结果提示,HBV可以抑制HepG2细胞中TRIM22的表达。【结论】1.TRIM基因多态性与HBeAg阳性CHB患者IFN-α疗效有关联,其中TRIM22rs10838543（GG+AG）与TIRM22水平升高呈正相关,TIRM22水平升高利于促进CHB患者IFN-α应答的发生,有望成为新的预测指标。2.TRIM22可能是IFN-α发挥抗HBV作用中的重要分子,同时TRIM22的表达可能也受HBV复制活动影响。