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帕金森病(PD)是人类最常见的与年龄相关的神经变性疾病之一。PD早期起病隐匿,后期临床表现多样且与多种疾病症状重叠致使诊断与鉴别诊断困难。PD病因及发病机制至今不明,尚缺乏有效的对因治疗手段。本课题以揭示α-突触核蛋白(?-synuclein)在PD发病机制,临床诊断标记物中所发挥的作用为研究目的,利用分子生物学、分子遗传学等方法分别对外源性?-synuclein对PD发病机制中的作用;汉族人群中?-synuclein基因两个单核苷酸多态位点rs11931074、rs894278与PD易感性的相关性及其基因型与唾液中?-synuclein含量的关系;唾液中?-synuclein表达变化对PD及相关神经变性病的诊断与鉴别诊断的意义进行了研究。本课题共分三个部分:第一部分野生型α-synuclein与其突变体A53T的寡聚体通过还原型辅酶II氧化酶(PHOX)激活小胶质细胞促进炎症反应的研究1)α-synuclein寡聚体对小胶质细胞的激活:以western blot等分子生物学技术首先对野生型聚集型?-synuclein及其聚集型突变体A53T对小胶质细胞的激活作用进行了验证;并发现聚集型A53T对小胶质细胞的激活比野生型更强,提示其可能通过不同的信号通路激活小胶质细胞。2)脂多糖(LPS)激活小胶质细胞引起p47-phox的转位。为明确p47-phox转位情况,以LPS刺激原代小胶质细胞,分别通过免疫荧光及亚细胞分离技术检测其转位情况,从而为证实PHOX在小胶质细胞激活以及随后的DA能神经元毒性中所起的关键作用提供直接证据,也为下一步探寻PD临床治疗潜在的治疗靶点的研究指明了方向。第第二部分?-synuclein基因snp与汉人群帕金森病的关联性研究1)分子遗传学研究:分别在总数为924例pd患者,718例健康对照与787例pd患者,695例健康对照汉族人群中明确?-synuclein编码基因snca的两个snprs894278和rs11931074与pd易感性的相关性。在进行年龄分层后rs894278与早发性帕金森病(eopd)发病无明显相关,与晚发性帕金森病(lopd)发病相关。和对照组比较,rs11931074与eopd、lopd发病均相关。支持其在散发性帕金森病发病中,遗传因素通过改变疾病易感性起到重要作用。2)分子生物学研究:应用dotblot这一传统技术分别检测了两个位点中部分pd患者唾液中?-synuclein的含量。?-synuclein与rs894278、rs11931074基因型并没有发现相关性,但表现出一定趋势。另外还发现eopd患者rs11931074的t/g出现频率与?-synuclein的含量明显相关。对tt型患者唾液中?-synuclein表达明显增高。这为我们下一步使用luminex技术检测pd患者唾液中?-synuclein奠定了很好的基础,指明了方向。第三部分唾液中?-synuclein对帕金森病诊断与鉴别诊断的作用1)唾液中?-synuclein总量的研究:使用dotblot分别对30例正常人,110例pd患者,18例原发性震颤(et)患者,18例帕金森综合征患者共计176例唾液标本中α-synuclein的含量进行了分析。结果首次提示唾液中α-synuclein含量变化既可作为pd诊断与鉴别诊断又可反映pd的病程进展的潜在性生物标记物。2)唾液中?-synuclein寡聚体的研究:通过hplc技术分离30例正常人,110例pd患者,18例et患者,18例pd综合征患者共计176例唾液唾液中α-synuclein的单体与寡聚体进行分析,结果首次提示唾液α-synuclein寡聚体既可作为PD诊断与鉴别诊断又可反映PD的病程进展的潜在性生物标记物。