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目的:观察戊地昔布与阿霉素联合应用对人肺癌A549细胞系的抑制效应,并初步探讨其作用机制。
方法:用MTT法检测化疗药物对人肺癌A549细胞系的抑制率；FCM(流氏细胞术)检测肿瘤细胞周期分布、细胞凋亡率和凋亡蛋白表达。
结果:
一.戊地昔布和吡柔比星单用或合用对A549细胞生长的抑制作用。
1.戊地昔布和吡柔比星单独或联合用药可时间和浓度依赖性抑制A549细胞的生长。
吡柔比星在6.3μmol/L-100μmol/L的药物浓度范围内,应用24h后抑制率是7.2％-37.5％,用药后48h,抑制率增加到11.1％-59.2％,用药后72h,抑制率增加到16.3％-71.9％,随时间的延长和浓度的增加,抑制率明显增加。在用药24h、48h和72h后的IC50分别是182μmol/L、62μmol/L和35μmol/L,随时间延长明显减小。
戊地昔布在19μmol/L-300μmol/L的药物浓度范围内,24h后抑制率是6.5％-32.0％,用药后48h时抑制率增加到9.3％-49.4％,72h时抑制率增加到15.9％-68.8％,随时间的延长和浓度的增加,抑制率明显增加。在用药24h、48h和72h后的IC50分别是838μmol/L、290μmol/L和134μmol/L,随时间延长明显减小。
联合应用戊地昔布和吡柔比星后,用药后24h抑制率是9.9％-48.5％,用药后48h时抑制率增加到24.0％-82.3％,72h时抑制率增加到31.6％-92.1％,随时间的延长和浓度的增加,抑制率明显增加。联合用药24h后,戊地昔布的IC50从单用的838μmol/L降低到合用的300μmol/L,降低了64.1％。吡柔比星的IC50从单用的182μmol/L降低到100μmol/L,降低了45.1％。联合用药48h后,戊地昔布的IC50从单用的290μmol/L降低到合用的72μmol/L,降低了75.2％。吡柔比星的IC50从单用的62μmol/L降低到24μmol/L,降低了61.3％。联合用药72h后,戊地昔布的IC50从单用的134μmol/L降低到合用的36μmol/L,降低了73.1％。吡柔比星的IC50从单用的35 uμmol/L降低到12μmol/L,降低了65.7％。无论是戊地昔布还是吡柔比星在合用后其IC50均明显降低。
2、戊地昔布和吡柔比星联合用药时的合用指数(CI)
合用24h、48和72h后,两种药物的合用指数在抑制率从0.1到0.9时均小于1,两种药物之间是协同作用。
3、戊地昔布和吡柔比星用药时间先后次序依赖关系
戊地昔布和吡柔比星同时用药的抑制率最高,其次是先用吡柔比星再用戊地昔布,抑制率最低者是先用戊地昔布后再用吡柔比星。
4、戊地昔布和吡柔比星合用不同药物浓度依赖关系
25μmol/L吡柔比星和19μmol/L戊地昔布合用,合用指数为1.06,5μmol/L戊地昔布与6.3μmol/L合用,合用指数为1.15,略呈拮抗作用。除此以外,两者合用指数大于均小于1,呈协同作用
5、药物对细胞周期和凋亡率的影响
对照组各期比例分别为:G0/G1期53.5％,G2/M期20.2％,S期26.3％。对照组凋亡率为6.7％。应用75μmol/L戊地昔布48 h后,G2/M期的细胞比例降低到17.8％,G0/G1期的细胞比例降低到60.8％,S期的细胞比例升高到21.4％,凋亡率提高到11.6％。应用25μmol/L吡柔比星48h后,G2/M期的细胞比例降低到13.7％,G0/G1期的细胞比例降到36.6％,S期的细胞比例升高到49.8％,凋亡率提高到22.3％。戊地昔布和吡柔比星二者联合应用后,G2/M期的细胞比例降低到16.5％,G0/G1期的细胞比例降到47.4％,S期的细胞比例升高到36.1％,凋亡率明显提高到30.8％。
6、药物对Bcl-2、Bax和caspase-3的影响
应用75μmol/L戊地昔布48 h后,Bcl-2的荧光指数降为0.94,但无统计学意义。Bax的荧光指数升高到1.19,Caspase-3的荧光指数升高到1.15。戊地昔布引起的凋亡主要与Bax和Caspase-3有关。应用25μmol/L吡柔比星48 h后,Bcl-2的荧光指数降为0.91,Bax的荧光指数升高到1.18,Caspase-3的荧光指数升高到1.19,均有统计学意义。吡柔比星引起的凋亡主要与Bcl-2、Bax.和Caspase-3都有关。戊地昔布和吡柔比星二者联合应用后,Bcl-2的荧光指数降为0.89,Bax的荧光指数升高到1.22,Caspase-3的荧光指数升高到1.21,均有统计学意义。戊地昔布和毗柔比星二者联合应用后,Bcl-2表达进一步减少、Bax和Caspase-3表达进一步增多。
结论:
1、戊地昔布和吡柔比星单独和联合用药可时间和浓度的依赖性抑制A549细胞的生长,均呈协同作用。
2、不同用药次序也影响药物联合作用,以两者同时用药作用最强。不同药物浓度比例对药物合用结果有影响。
3、戊地昔布和吡柔比星的作用与诱导凋亡和影响细胞周期有关,二者合用后凋亡率明显增加。