新城疫(Newcastle Disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种发病急、致死率高的禽传染病,在世界范围内广为传播,是危害养禽业最大的禽病之一。由于NDV有多个基因型,常规疫苗的免疫效果并不理想,新型疫苗的研制又总是落后于病原的变异。因此,深入了解家禽抗感染作用的天然免疫调控机制,提高禽机体的免疫能力,寻找抗NDV感染的新途径显得极为重要。禽β-防御素(Avian beta defensins,Av BDs)是富含阳离子的宿主防御肽,具有抗细菌、真菌以及病毒的活性,在禽先天性免疫及获得性免疫中发挥着重要作用。为探讨禽β-防御素体内对不同来源新城疫病毒的免疫调节作用机制,本试验选用30只20日龄SPF鸡,随机分为三组,即对照组和两组攻毒组。对照组不攻毒,攻毒组采用点眼滴鼻法分别接种鸡源NDV强毒(F48E9病毒株)和鸭源NDV强毒(Md/CH/LGD/1/2005)。在攻毒后24 h后和48 h,每组各取出5只,分别采集鸡脑、气管、肺脏、肾脏、肝脏、腺胃、骨髓、脾脏、盲肠扁桃体、哈德氏腺、法氏囊组织。采用实时荧光定量RT-PCR法检测攻毒前后各组织器官中的NDV病毒载量以及13种Av BDs、8种鸡Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)、3种信号转导分子、11种细胞因子基因的表达量。结果显示:对照组各组织均未检测到病毒。在感染两种NDV后24 h和48 h,两个攻毒组鸡各组织均检测到病毒,且在感染后48 h,各组织的病毒载量均高于感染后24 h各组织的病毒载量。在感染后48 h,鸭源Md在各组织的表达量均高于鸡源F48E9病毒株的表达量。与对照组相比,攻毒后鸡Av BD2、3、4、5、6、9、10在大部分组织内表达量均有不同程度的增加。其中,感染鸭源Md病毒株后48 h,Av BD2在肾脏中的表达量显著升高(P<0.05),Av BD5在肺脏中的表达显著上调(P<0.05)。同时发现,感染两种NDV后,TLR2、3、4、7在肺脏和肾脏的表达量均增加,感染鸭源Md病毒株后48 h,TLR2、3、4、7在肺脏中均显著表达(P<0.05)。感染两种NDV后,My D88在11种组织内的表达均上调,而IRF-7和IFN-β均没有明显变化。感染鸭源Md病毒株后48 h,IL-8、IFN-γ在肺脏中的表达量显著增加(P<0.05),在感染鸭源Md病毒株后24 h肾脏中IFN-γ的表达量以及在感染鸭源Md病毒株后24 h和48 h肾脏中MHC class II的表达量均显著下调(P<0.05)。本研究结果显示,机体受到NDV的感染后,可能通过启动TLR2、4、7介导的My D88以及TLR3介导的TRIF途径,诱导Av BD2、5基因上调表达,同时刺激IL-8、IFN-γ以及MHC class II基因的表达量发生变化,从而参加机体的对新城疫病毒的免疫反应。为探讨鸡Av BDs是否具有直接抗NDV的作用,根据经NDV感染后,鸡组织中各Av BD表达变化,我们选择鸡Av BD2进一步研究鸡Av BD的抗NDV病毒作用。通过细胞接种和鸡胚接种试验测定重组鸡Av BD2重组蛋白的体外NDV的作用。结果发现:与对照组相比,经重组蛋白中和后的病毒液接种细胞和鸡胚,病毒含量均有降低趋势,但差异不显著,还需进一步的研究证明其体外抗NDV的作用。综上所述,NDV能够诱导鸡Av BD2、5基因的表达量显著上调。机体受到NDV的感染后,可能通过启动TLR2、4、7介导的My D88以及TLR3介导的TRIF途径,诱导Av BD2、5基因上调表达,同时刺激IL-8、IFN-γ以及MHC class II基因的表达量发生变化。