论文部分内容阅读
第一部分携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗双靶向超声造影剂的制备及体外显影实验目的制备同时携抗ICAM-1单抗和CD34单抗的双靶向超声造影剂，鉴定其基本性质并进行体外显影实验。方法采用“生物素-亲和素”桥接法分别构建携抗ICAM-1单抗和CD34单抗的双靶向造影剂（MBRDR）、携抗ICAM-1单抗（MBRICAM-1）和CD34单抗(MBRRCD34RR)的3种靶向造影剂。光学显微镜下观察靶向微泡造影剂的形状，马尔文激光粒度分析仪、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪检测靶向微泡的基本特性和抗体结合率，DFY超声图像定量分析仪分析超声造影剂的回声强度。结果3种靶向微泡造影剂的形状、粒径、表面电位及抗体结合率均无统计学差异(P>0.05)，激光共聚焦显微镜下观察抗体成功的链接到造影剂表面，DFY超声图像定量分析仪结果：MBRD的回声强度高于MBICAM-1、MBCD34RR和普通生物素化微泡（MBBiotin）（P<0.01）。结论成功的制备了携抗ICAM-1单抗和CD34单抗双靶向超声造影剂。第二部分携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗双靶向超声造影剂的体外实验研究第一节体外分离、培养大鼠骨源性内皮祖细胞及鉴定目的体外分离、诱导扩增培养大鼠骨髓源性内皮祖细胞（EPCs），并进行基本特性鉴定。方法密度梯度离心法收集到的大鼠骨髓单个核细胞，接种到纤维黏连蛋白预先铺被好的培养瓶中，添加特殊培养基EGM-2MV对EPCs进行诱导扩增培养，倒置显微镜下观察细胞形态变化，通过细胞免疫荧光检测：CD34、CD133、VEGFR-2表达情况，及摄取DiI-acLDL和结合FITC-UEA-1双荧光染色对其进行鉴定，用MTT法及细胞移行实验检测EPCs生长情况及迁移能力。结果新分离的骨髓单个核细胞呈圆形，大小不一；贴壁细胞CD34、CD133、VEGFR-2的表达均成阳性，7d后的细胞能摄取DiI-acLDL和结合FITC-UEA-1，细胞移行实验可见平均每个视野细胞移行数（16.6±1.05）个。结论通过密度梯度离心法，在EGM-2MV培养体系下，能较好的培养并扩增出内皮祖细胞。第二节携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗双靶向超声造影剂的体外靶向实验目的探讨携抗ICAM-1单抗和抗CD34单抗双靶向超声造影剂的体外靶向能力。方法通过“生物素-亲和素”法构建携抗ICAM-1单抗和CD34单抗的双靶向微泡造影剂（MBDRR）、携抗ICAM-1单抗（MBICAM-1RR）和CD34单抗(MBRRCD34RR)的3种靶向造影剂；用细胞免疫荧光法鉴定，重组人坏死因子-α（TNF-α）刺激人脐静脉内皮细胞建立的内皮损伤模型；倒置显微镜下观察双靶向微泡与内皮祖细胞（EPCSR）和损伤人脐静脉内皮细胞（HUVECS）的结合情况。结果激光共聚焦显微镜下见：经TNF-α刺激后HUVECRS胞浆内见大量绿色荧光，说明经刺激后的细胞ICAM-1表达增多；倒置显微镜下可见双靶向造影剂与内皮祖细胞和损伤人脐静脉内皮细胞有较好的结合能力。结论成功制备出的携抗ICAM-1单抗和CD34单抗的双靶向超声造影剂有较强的体外靶向能力。