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弧菌病是影响海水养殖业的主要病害之一，现在大部分采用的是化学药物及抗生素治疗。但是这些治疗药物易残留，不但对水体环境产生污染，而且由于药物的使用不当，易产生耐药性菌株。关于弧菌病的防治越来越多的趋向于绿色健康化的疫苗。溶藻弧菌是四大类病原弧菌之一，其数量最多，致病性仅次于副溶血弧菌。弧菌外膜蛋白是一种较好的潜在交叉疫苗原，而课题组前期实验发现溶藻弧菌来源的一种LamB蛋白在弧菌属中有较好的交叉免疫原性。数据库比对发现溶藻弧菌至少存在三种不同的LamB蛋白，据此本课题首先主要研究比较三种LamB蛋白在弧菌中的交叉免疫原性，得到的初步结果如下： 首先从本实验室保存的溶藻弧菌中成功将三种lamB基因克隆、序列分析，发现三种lamB自身相似性极低，但与已报道的弧菌属lamB有较高的相似性、并且有多个保守性的抗原表位，这表明三种LamB在弧菌属中具有交叉免疫原性。通过系统发育树比较，LamB3的保守性可能不如LamB1和LamB2。 其次进行了三种lamB基因的原核表达及交叉免疫原性研究。与pET-32a(+)质粒进行酶连后转化大肠杆菌BL21，经IPTG诱导后目的蛋白以包涵体形式大量存在；经NI-NTA纯化，对目的蛋白进行验证后制备抗血清。利用Western-blotting及whole-cell ELISA检测三种LamB蛋白在弧菌属种间及种内的交叉免疫原性及细胞定位，结果证实LamB1和LamB2在弧菌属具有交叉免疫原性，并且抗原表位位于细菌表面能够被多克隆抗体库所识别；而LamB3的交叉免疫原性不如LamB1和LamB2，可能需要以交叉免疫保护性进一步验证。 抗生素耐药性问题已是全球必须面对的严峻问题。由于溶藻弧菌对多种抗生素有较高的耐受性，并且据报道，LamB蛋白差异性表达为革兰氏阴性菌产生抗生素耐药性的主要方式之一，因此接下来的实验主要研究三种LamB蛋白是否在菌株耐药性产生中发挥了一定的作用。 经抗生素反复诱导，最终得到10种符合抗生素耐受性标准的耐药菌株。SDS-PAGE发现耐受菌株中多种蛋白发生差异性表达，经Western-blotting检测，三种LamB蛋白在耐药性菌株中均有一定的差异性表达。LamB1主要在5种抗生素耐受菌株中表达量上调，而LamB2在10种抗生素耐受菌株中均下调表达，LamB3在9种抗生素耐受性菌株中表达下调；这表明三种LamB蛋白可能均参与了菌株的耐药性产生。