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目的:制备乳铁蛋白修饰的白藜芦醇纳米粒(Lactoferrin modified Resveratrol Nano Particles,Lf-Res-NPs),考察其在小鼠体内药物代谢动力学,观察其对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)模型大鼠的干预作用,初步评价其脑靶向作用。方法:(1)界面聚合法制备白藜芦醇纳米粒(Resveratrol Nano Particles,Res-NPs),星点设计优化处方和工艺,采用羟基聚乙二醇马来酰亚胺(Hydroxyl-PEG-Maleimide,OH-PEG-MAL)的-OH基团链接Res-NPs,MAL基团与活化后的乳铁蛋白巯基结合,制备Lf-Res-NPs,激光粒度分析仪检测其粒径,透射电镜观察其形态。(2)SPF级昆明小鼠270只,雄性,随机分为3组:Res溶液组、Res-NPs组和Lf-Res-NPs组。常规饲养1周后腹腔注射给药,给药后0.17、0.5、0.75、1、2、6、10、12、24h采血,每个时间点10只小鼠。采用HPLC法分析血浆及组织中药物浓度,计算药代动力学参数和各组织靶向指数。(3)SPF级SD大鼠50只,雌雄各半,随机分为正常组、AD模型组、Res溶液组、Res-NPs组和Lf-Res-NPs组,每组10只。正常组每天腹腔注射生理盐水和灌胃蒸馏水,其余各组腹腔注射D-半乳糖150mg·kg-1·d-1和灌胃三氯化铝10mg·kg-1·d-1,连续65d。第31d正常组和AD模型组腹腔注射生理盐水,药物干预组腹腔注射不同剂型Res,Res给药剂量为30mg·kg-1·d-1。造模65d后,Morris水迷宫检测大鼠认知功能;比色法检测血清及脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活力及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;免疫组织化学染色观察海马β-淀粉样蛋白1-42(βeta amyloid peptides1-42,Aβ1-42)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cysteinecontaining aspartate-specific protease3,Casepase-3)表达;ELISA法检测海马组织Aβ1-42的表达;Western Bolt检测海马β-淀粉样前体蛋白(βeta-Amyloid precursor protein,APP)、Caspase-3及核转录因子-κB(Nuclear factor-κB,NF-κB)蛋白的表达。结果:(1)(1)Res-NPs制备最佳处方:油水体积比4.0m L:8.0m L,水相p H 2.0,右旋糖酐-70 50mg,Res 48mg,BCA 52μL。其粒径(229.02±4.30)nm,载药量(10.13±0.96)%,包封率(80.36±2.70)%;(2)在p H7.4 PBS释放介质中,Res溶液2h累积释放Res(80.26±1.61)%,8h累积释放Res(86.16±0.10)%;Res-NPs 2h累积释放Res(56.77±2.47)%,8h累积释放Res(73.11±7.14)%,72h累积释放Res(80.24±2.78)%;Res-NPs中加入血浆时,2h累积释放Res(56.62±0.30)%,8h时累积释放Res(82.22±3.22)%,72h累积释放Res(87.96±0.72)%;(3)Lf-Res-NPs粒径(240±4.652)nm,透射电镜鉴定Lf与Res-NPs成功连接。(2)(1)药代动力学结果显示:与Res溶液组药时曲线下面积(AUC(0-∞))、生物半衰期(t1/2z)、达峰时间(Tmax)、达峰浓度(Cmax)和清除率(CLz/F)比较,Res-NPs组和Lf-Res-NPs组AUC(0-∞)、t1/2z、Tmax、Cmax增加,CLz/F降低(P<0.05);与Res-NPs组比较,AUC(0-∞)、t1/2z、Tmax、Cmax增加,CLz/F降低(P<0.05);(2)Res溶液组和Res-NPs组药物主要集中在肝和肾组织,Lf-Res-NPs组药物主要集中在肝、脾和脑组织,给药120min后Res溶液组脑靶向指数最大值为14.263%,Res-NPs组脑靶向指数最大值为20.980%,Lf-Res-NPs组脑靶向指数最大值为26.879%,其Lf-Res-NPs组比Res-NPs组增加1.3倍,比Res溶液组增加1.9倍;且给药后10、12、24h Lf-Res-NPs组脑靶向指数显著高于其余两组,差异有统计学意义(P<0.05)。(3)(1)水迷宫定位航行结果显示:与正常组比较,AD模型组1-4d逃避潜伏期延长(P<0.05);与AD模型组比较,不同剂型Res干预的各组2-4d逃避潜伏期缩短(P<0.05);与Res溶液组比较,Res-NPs组和Lf-ResNPs组在第3-4d逃避潜伏期缩短(P<0.05);与Res-NPs组比较,Lf-Res-NPs组在第4d逃避潜伏期缩短(P<0.05);空间探索结果显示:与正常组比较,AD模型组穿环次数和滞留时间减少(P<0.05);与AD模型组比较,不同剂型Res干预的各组穿环次数与滞留时间增加(P<0.05);不同剂型Res组间比较,Lf-Res-NPs组穿环次数与滞留时间增加(P<0.05)。(2)与正常组比较,AD模型组血清及脑组织内SOD和GXH-PX活力降低,MDA含量升高(P<0.05);与AD模型组比较,Res-NPs组和Lf-Res-NPs组血清及脑组织SOD和GSH-PX活力升高,MDA含量降低(P<0.05);不同剂型Res组间比较,Lf-Res-NPs组血清及脑组织SOD和GSH-PX活力增加,MDA含量降低(P<0.05)。(3)免疫组化结果显示:与正常组比较,AD模型组大鼠海马Casepase-3和Aβ1-42蛋白表达增加(P<0.05);与AD模型组比较,不同剂型Res干预的各组大鼠海马Casepase-3和Aβ1-42蛋白表达降低(P<0.05);不同剂型Res组间比较,Lf-Res-NPs组大鼠海马Casepase-3和Aβ1-42蛋白表达降低(P<0.05)。(4)ELISA检测结果显示:与正常组比较,AD模型组大鼠海马Aβ1-42蛋白表达增加(P<0.05);与AD模型组比较,不同剂型Res干预的各组大鼠海马Aβ1-42蛋白表达降低(P<0.05);不同剂型Res组间比较,Lf-Res-NPs组大鼠海马Aβ1-42蛋白表达降低(P<0.05)。(5)Western bolt结果显示:与正常组比较,AD模型组大鼠海马Casepase-3、NF-κB和APP蛋白表达增加(P<0.05);与AD模型组比较,不同剂型Res干预的各组大鼠海马Casepase-3、NF-κB、APP蛋白表达降低(P<0.05);不同剂型Res组间比较,Lf-Res-NPs组大鼠海马Casepase-3、NF-κB、APP蛋白表达降低(P<0.05)。结论:(1)制备得到粒径为(240±4.652)nm Lf-Res-NPs。(2)Lf-Res-NPs可延长Res在小鼠体内的作用时间,增加Res在小鼠体内的生物利用度,提高Res的脑靶向作用,减少其他组织对Res的摄取。(3)Lf-Res-NPs可递送更多Res进入脑内,增加脑内Res浓度,提高抗氧化能力,抑制海马神经元APP和Aβ1-42蛋白表达,减轻神经元凋亡和炎症反应,效果较Res溶液和Res-NPs好。