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穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Markino.)为我国薯蓣科薯蓣属植物穿山龙的根茎,在我国分布广泛,有悠久的药用历史,作为传统中药具有治疗风湿性关节炎,麻木,慢性支气管炎,咳嗽气喘等作用,现在是多种治疗心血管疾病药物重要成分,同时也是合成甾体激素类药物起始原料薯蓣皂苷元的重要原材料。近年随甾体皂苷生物活性研究的深入,发现其所含皂苷化合物具有多种药理活性,药用价值很高。为深入研究薯蓣皂苷的药理活性提供大量高品质皂苷原料药,更好的开发这一资源,本课题研究了穿龙薯蓣中皂苷的分离纯化工艺,为薯蓣资源的综合利用提供依据。主要研究内容如下: 1.含量测定方法研究。以薯蓣皂苷(Dioscin)为对照品,分别建立了分光光度法测定穿龙薯蓣中总皂苷及高效液相色谱法测定穿山龙提取物中薯蓣皂苷(Dioscin)含量的方法。 2.总皂苷提取工艺研究。以总皂苷和薯蓣皂苷产率为指标,通过正交试验优化了回流法提取穿龙薯蓣总皂苷的工艺。提取工艺为:85%甲醇以8倍量提取一次,再以5倍量提取两次,每次回流2h。 3.溶剂法分离纯化皂苷研究。重点考察了乙酸乙酯作为溶剂萃取薯蓣皂苷的工艺,通过ESI-MS/MS及HPLC分析发现,采用乙酸乙酯作为萃取剂可以得到穿龙薯蓣主要活性成分—薯蓣皂苷。 4.醇提水沉与大孔树脂法相结合分离纯化总皂苷的研究。通过醇提液调节pH-水沉-大孔树脂吸附联用技术,考察了总皂苷的分离纯化工艺,研究了水难溶性皂苷的制备,优化了大孔树脂富集水溶性皂苷工艺,分别获得含量大于95%的水难溶性皂苷和含量大于60%水溶性总皂苷。 5.高纯度薯蓣皂苷(Dioscin)的分离纯化。通过优化硅胶柱色谱分离纯化条件,制备了高纯度薯蓣皂苷(纯度≥98%),并以波谱法鉴定其结构,以色谱法测定其含量。