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少根根霉是一种常见的工业微生物,也是被美国FDA认证的食品安全菌。少根根霉脂肪酶具有较强的sn-1,3位专一性,可高效水解甘油三酯一位和三位的酯键,在医药、食品、化工等多个领域均有应用,但目前少根根霉野生菌的脂肪酶产量不高,为了获得具有较强产脂肪酶能力的目的菌株,需对少根根霉进行诱变选育,并且通过发酵工艺的优化使其脂肪酶活进一步提高,基于此目的本文以少根根霉为出发菌株做了以下几点工作。1.实验分别采用了紫外+LiCl诱变、硫酸二乙酯(DES)诱变对少根根霉进行诱变选育。首先,通过实验确定最佳诱变条件。然后,对少根根霉进行紫外+LiCl诱变,最终得到1株目的菌株酶活为522 U/mL,编号为Z-3。接下来以Z-3为出发菌株进行DES诱变,经初筛及复筛后,最终得到一株目的菌株55#,经遗传稳定性试验验证其酶活稳定在620U/mL,是诱变前酶活(46 U/mL)的13.5倍。2.为提高少根根霉在发酵过程中的脂肪酶产量,本文对发酵过程中的培养条件及培养基成分进行了选择优化。首先对发酵时的菌体形态以及接种量进行确定,接下来对发酵培养基中的成分进行了探究优化,通过摇瓶发酵分别研究了诱导油、氮源、碳源以及无机盐离子等成分及培养条件等多个因素对少根根霉发酵产酶的作用及影响,确定最佳接种量为15%,最优培养基为:Tryptone 10 g/L,(NH4)2SO4 3 g/L,Glucose 20 g/L,KH2PO41g/L,MgSO4·7H2O 0.5 g/L,Corn oil 10 g/L,以菌球形态在发酵 pH 为 7,摇床转速为200r/min,30℃条件下进行发酵,测得酶活最高是3068U/mL,是对发酵工艺进行优化前的4.95倍。3.利用冷丙酮法将发酵液中的脂肪酶分离出来,将预处理后的发酵液与丙酮在冰浴条件下缓慢混合,沉淀完全后在4℃,6000 r/min,条件下离心6 min,丙酮回收,将剩余的沉淀取出置放于平皿中,于通风橱中使其自然风干后研磨成粉,其酶活为224800 U/g,酶活收率为46.9%。