CD82是Ⅲ型四次跨膜蛋白超家族的成员之一,在人体的许多组织中广泛表达,参与多种生理过程,如细胞迁移、黏附和信号传导,最初被鉴定为T细胞激活的辅助分子,在高等脊椎动物T细胞和抗原呈递细胞中能够参与免疫突触的形成。在本实验室已获得日本七鳃鳗CD82基因序列的基础上,本文首先利用生物信息学方法将CD82分子和CD37分子进行了进化比较分析,由此鉴定已获得的七鳃鳗CD82的确属于脊椎动物CD82分子。pCold TF载体是一种插入蛋白可溶性标签的融合性冷休克原核表达载体,利用Overlap PCR方法设计引物将载体进行改造,命名为GpCold TF。构建GpCold TFCD82表达载体,使难以在原核宿主中表达的四次跨膜蛋白得到了可溶性表达。经组氨酸亲和层析柱纯化和Factor Xa蛋白酶切,最终获得去除助溶蛋白TF标签的七鳃鳗CD82重组蛋白纯品。通过OptimumAntigenTM抗原设计软件,利用多肽合成技术,合成七鳃鳗CD82特异性的抗原表位多肽,以此抗原表位免疫刺激新西兰兔制备兔源七鳃鳗CD82多克隆抗体。通过Western Blot方法,以β-actin为内参,检测CD82天然蛋白在七鳃鳗免疫刺激前后各组织中的表达差异,以及加强免疫后各时间点的表达差异。结果显示,CD82天然蛋白在七鳃鳗白细胞、鳃、髓样小体和肾脏中稳定表达,且免疫刺激后在白细胞、鳃和髓样小体的表达量显著上调;白细胞、鳃和髓样小体分别在加强免疫后12h、6h和12h时CD82天然蛋白表达量最高。上述结果证明CD82能够参与七鳃鳗类淋巴细胞的免疫应答,在对外来病原菌的防御反应中发挥重要作用。进一步利用免疫荧光技术,使用荧光共聚焦显微镜检测分析CD82天然蛋白在单核白细胞中的定位和分布,发现CD82不仅分布于细胞膜上,而且也分布于细胞质中,在免疫刺激后CD82蛋白从细胞质转移到细胞膜上。此结果进一步证明CD82在七鳃鳗的免疫应答中扮演重要角色。综上所述,CD82能够参与现存最古老的无颌类脊椎动物七鳃鳗的免疫应答过程,这为从蛋白水平上探索原始脊椎动物的适应性免疫系统的起源与进化提供了线索,同时为进一步研究CD82在无颌类脊椎动物的免疫应答过程的具体功能奠定了基础。