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石斛(Dendrobium)是典型的药用草本植物,其有效成分石斛碱、石斛多糖和氨基酸有提高机体免疫力,及养胃生津、抗肿瘤、抗疲劳等功效。石斛属植物是典型的菌根植物,在自然条件下生长的石斛从种子萌发、植株营养生长到生殖生长均需要内生真菌的参与。本文利用组织分离法对采自浙江省的野生石斛内生真菌的种类及其生物活性进行了初步研究。结果如下: 1.对浙江省野生石斛内生真菌进行分离鉴定。共分离获得菌根真菌31株,通过形态学分析方法并结合rDNA ITS序列的分子技术,鉴定这些菌株分别属于6个属和1个科,包括木霉属(Trichoderma)、链格孢属(Alternaria)、镰刀菌属(Fusarium)、赤霉菌属(Gibberella)、耙齿菌属(Irpex),炭角菌科(Xylariaceae)。其中,链格孢属(Alternaria)和赤霉菌属(Gibberella)为优势茵群,分别占真菌总数的35.5%和32.2%。 2.对浙江省野生石斛内生真菌的抗菌活性进行筛选鉴定。采用平板对峙实验,初步筛选获得22株具有拮抗活性的内生真菌,经鉴定分别归属于木霉属(Trichoderma)、链格孢属(Alternaria)、镰刀茵属(Fusarium)、耙齿菌属(Irpex)、炭角菌科(Xylariaceae)。 3.建立铁皮石斛-内生真菌共生体系。以铁皮石斛无菌幼苗为材料,建立其与节菱孢属内生真菌的共生体系。对根系石蜡切片显微观察发现,菌丝先聚集在根被,随后由通道细胞侵入,经由外皮层进入皮层细胞,真菌在皮层细胞内大量繁殖生长,形成典型的菌根结构。 4.对石斛重要病原真菌进行分离鉴定。共分离获得4种病原真菌,分别为尖孢镰刀菌(F.oxysporum)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、黑孢霉(Nigrospora oryzae)及枝孢霉(Cladosporium)真菌。致病性实验证实,胶孢炭疽菌和黑孢霉是引起石斛叶枯病、叶斑病的主要原因。