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论文设计了一类甘油型阳离子类脂,合成共计8个化合物。建立了中间体N,N-二甲基-(2,3-双烷氨基甲酸酯)丙胺及目标分子的合成路线及工艺。经重结晶分离提纯后,得到了高纯度的目标产物,全部经过ESI-MS、IR、1H NMR和13C NMR表征,证实产物结构与设计相符,HPLC、MS纯度达到转染要求。
采用所合成的阳离子类脂制备了阳离子脂质体,采用动态光散射以及Zeta电位仪等手段对其进行研究,初步得到阳离子类脂及由其所制备出的阳离子脂质体的结构与性能的关系。
利用琼脂糖凝胶电泳研究了脂质体与DNA的结合能力。结果表明,脂质体与DNA的结合能力随着脂质体/DNA比例的增大而增加;DOPE的加入对脂质体/DNA复合物的延滞作用有一定的影响;头部结构、平衡阴离子以及疏水尾链长度对阳离子脂质体亲水疏水平衡的影响使其与DNA的结合能力也表现出差异性。
利用所制备的阳离子脂质体作为基因运载工具,转运质粒DNA pGL3-control和pGFP-N2,对MCF-7、Hep-2和HeLa三种细胞株进行了体外转染,研究了阳离子类脂结构与其转染效率之间的关系。结果表明:当脂质体与DNA比例发生变化时,其转染效率也随着改变,而且存在一个最佳比例(2/1~3/1附近);转染效率与阳离子类脂头部平衡阴离子以及助类脂DOPE使用密切关联而又复杂变化,在这些参数调节的阳离子脂质体亲水亲脂平衡达到一种较好的状态时可以得到满意的转染效果。与两种商品化基因转染试剂Lipofectamine2000及DOTAP进行了对照研究,本论文所合成的阳离子类脂CPA12、CPG12、CPH12和CPI12的转染效率与商品化转染试剂相当,阳离子类脂CPA14、CPD14、CPB12和CPD12还需进行深入研究。
采用MTT法对阳离子脂质体进行了细胞毒性的评价,证明了所制备的阳离子脂质体经过优化后,细胞毒性较低,具有作为基因载体的应用前景。