甜叶菊(Stevia rebudica)是一种新型糖料作物,其叶片含有天然甜味剂甜菊醇糖苷,在食品,医药等领域具有重要的应用。植物基因工程的发展,为改良甜叶菊性状提供了有力工具,将传统育种与分子育种相结合可以缩短育种周期、创新种质资源。培育高RA含量甜叶菊品种具有重要的实际意义,是甜叶菊育种的重要目标之一。UGT76G1(GenBank登录号:AY345974)基因是从甜叶菊叶片中克隆出的一种葡糖基转移酶基因,能够将St转化为RA,通过在甜叶菊中过量表达目的基因的方法有望提高RA的转化率,降低St的含量。本研究从甜叶菊守田2号基因组总DNA中分离克隆UGT76G1基因,构建了 UGT76G1基因的过量表达载体,并利用发根农杆菌介导法转化守田2号,从而获得转基因甜叶菊。主要结果如下:1、构建了含有基因全长序列的过量表达载体pRI 101-ANDNA:::UGT76G1;用PCR、酶切和测序方法验证了重组质粒。2、建立甜叶菊守田2号茎尖高效遗传转化和再生体系:最佳的遗传转化体系为菌液浓度OD600为0.6;乙酰丁香酮浓度为100μmol/L;侵染时间为30min;共培养时间为3d。3、发根农杆菌介导转化甜叶菊守田2号。用含有重组质粒的农杆菌A4侵染甜叶菊守田2号,均得到了 Kan抗性发状根。共得到5株抗性再生植株,初步证实了过量表达载体的插入。