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[目的]
观察大柴胡汤对慢性胰腺炎小鼠胰腺纤维化及氧化相关指标的影响,以探讨大柴胡汤对慢性胰腺炎的治疗作用及抗氧化机制。
[方法]
健康雄性昆明小鼠随机分为3组(n=70):空白组(Control,Con组)、慢性胰腺炎(Chronic Pancreatitis,CP)模型组、大柴胡汤(Entrapement ScatteredDaChaiHu)治疗组。模型组及治疗组经尾静脉一次性注射二丁基二氯化锡(Dibutyltin dichloride,DBTC8mg/kg)后联合10%乙醇饲喂造模,造模后第三天随机分为模型组和大柴胡汤治疗组,治疗组以大柴胡汤(0.5g生药/ml,0.06g/10g/d)进行灌胃治疗。各组在干预后第2周、第4周、第8周三个时间点分别麻醉处死动物,取胰腺组织,甲醛固定、石蜡包埋、切片,HE染色及胶原纤维(Masson)染色观察组织病理学改变;取新鲜胰腺组织制成组织匀浆,检测胰腺组织SOD、MDA和MPO含量的变化。
[结果]
1.DBTC联合乙醇诱发小鼠慢性胰腺炎模型胰腺病理变化及胰腺氧化损伤指标
HE染色显示:DBTC尾静脉注射后1天,可见胰腺腺泡细胞肿胀,间质充血水肿并有中性粒细胞及单核细胞浸润。胰腺腺泡多处不同程度的片状坏死,周围轻度炎细胞浸润,呈明显的急性胰腺炎表现;CP2w组胰腺组织出现间质水肿,较多炎性细胞浸润,导管内可见少量粘液及组织碎片沉积,并可见部分腺泡出现小灶性坏死。CP4w组部分胰腺组织结构破坏明显较2w组严重,出现明显纤维化,炎性细胞浸润也明显增加。CP8w组有较大程度组织结构破坏和明显纤维化,腺泡和胰腺萎缩,间质有淋巴细胞、浆细胞浸润,呈慢性胰腺炎病理表现。胶原纤维(Masson)染色显示造模2w后成纤维细胞出现;4w后纤维化程度明显,腺泡和胰腺萎缩,原有小叶结构不完整;8w后纤维增生明显,胰腺组织被增生的纤维所取代。DBTC尾静脉注射联合饮用乙醇后,随病程的延长(2w、4w、8w),胰腺组织中SOD活性逐渐降低,MDA和MPO逐渐升高,与正常组各时间点相比,有明显差异(P<0.05);
2.大柴胡汤对DBTC联合乙醇诱发的慢性胰腺炎的治疗作用及机制
大柴胡汤治疗组形态学观察:与同时间点模型组相比,治疗2w组胰腺腺泡细胞肿胀程度减轻,间质小血管轻微扩张、充血,间质中仍可见炎细胞浸润,4w组织坏死程度大为减轻,8w可见胰腺小叶较宽,腺泡细胞排列整齐,仅见少量纤维组织沉积。胶原纤维染色显示:大柴胡汤2w组间质中蓝染的胶原纤维减少,4w组除实质细胞的坏死数目减少外,间质中的蓝染纤维的范围与数量均有所减少,8w组纤维化程度明显减轻,胶原纤维在间质中所占的空间大范围减少,颜色明显变浅。随用药时间延长,大柴胡汤各时间点的胰腺组织SOD水平逐渐回升,MDA和MPO也有所回落。与相同时间点模型组相比,显著性差异(P<0.05)。
[结论]
1.通过DBTC尾静脉注射联合饮用乙醇建立小鼠CP模型有胰腺氧化损伤,胰腺的氧化损伤是慢性胰腺炎胰腺纤维化的治疗靶点之一;
2.大柴胡汤有效抑制胰腺组织的纤维化,对慢性胰腺炎胰腺纤维化损伤具有治疗作用,其机制与抗氧化损伤有关。