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目的:角膜浑浊是造成视力下降的重要原因之一。角膜创伤愈合过程中,肌成纤维细胞的出现和异常角膜基质的形成是角膜纤维化的重要原因。糖皮质激素和丝裂霉素C可以抑制角膜纤维化,但具有明显副作用。因此,研发安全有效的抗纤维化药物极为必要。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)δ在细胞增殖、分化和组织创伤愈合等方面具有重要作用。研究证实PPARδ激动剂抑制血管平滑肌细胞、心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成,并通过抗炎作用减轻肝纤维化。但目前关于PPARδ是否具有抗角膜基质纤维化作用方面尚无相关研究。本工作利用准分子激光切削角膜造成基质损伤,应用GW501516激活PPARδ,观察GW501516对角膜创伤愈合的影响,首次实验并探讨PPARδ的抗角膜基质纤维化作用及机制。方法:1.利用准分子激光治疗性角膜切削术(PTK)切削SD大鼠的中央角膜,切削直径4.5 mm,切削深度50μm或70μm。术后裂隙灯检查对比角膜浑浊度,选择合适的切削深度。角膜共聚焦显微镜检查及HE染色检查评估角膜创伤愈合反应。2.实验分4组,分别球结膜下注射PBS,GW501516(PPARδ激动剂),GSK3787(PPARδ拮抗剂)或GW501516联合GSK3787。术后给药每周2次直到处死大鼠。3.术后裂隙灯检查眼表情况:术后早期利用荧光素染色法观察上皮愈合情况,术后每周观察角膜新生血管情况,进行中央角膜浑浊度评分,共观察4周。4.术后1周、2周及4周,共聚焦显微镜观察活体角膜基质细胞及细胞外基质的变化。观察并对比各组前部角膜基质的相对反光强度。5.术后2周及4周,HE染色法观察角膜组织愈合情况并对中央角膜的基质细胞进行计数。6.术后2周及4周,免疫荧光染色法检测角膜组织中α-SMA、III型胶原和纤维连接蛋白的表达。7.术后4周,实时荧光定量PCR检测Ki67抗原、α-SMA、III型胶原、I型胶原和纤维连接蛋白的mRNA相对表达量。结果:1.利用PTK切削SD大鼠的中央角膜,切削直径4.5 mm,切削深度70μm,该方法安全有效,可获得理想的角膜浑浊程度并引起角膜损伤修复反应。2.激活PPARδ延迟角膜上皮愈合:术后24和48小时,GW501516组角膜上皮缺损面积大于其它各组,具有统计学差异。3.激活PPARδ促进角膜新生血管形成:术后1周及2周,GW501516组角膜新生血管面积大于其它各组,具有统计学差异。4.激活PPARδ改善角膜透明度:术后4周,GW501516组角膜浑浊度评分较GSK3787组低,具有统计学差异。5.激活PPARδ抑制基质细胞的激活和增殖:术后4周,共聚焦显微镜活体检查见GW501516组基质细胞形态安静,细胞外基质反光较低;GSK3787组基质细胞形态活跃,细胞外基质反光较强。和其他各组相比,GW501516组前部基质相对反光强度降低,具有统计学差异。基质细胞计数示GW501516组基质细胞数明显低于PBS组和GSK3787组,具有统计学差异。同时,GW501516组角膜基质的Ki67抗原mRNA表达较其它各组降低,具有统计学差异。6.激活PPARδ抑制基质细胞转化为肌成纤维细胞:术后2周,免疫荧光染色证实前部及中部角膜基质内存在α-SMA阳性细胞,各组间未见明显差异。术后4周,GW501516组的α-SMAmRNA较其它各组降低,具有统计学差异。7.激活PPARδ抑制细胞外基质的合成:术后4周,同PBS组和GSK3787组相比,免疫荧光染色证实GW501516组的Ⅲ型胶原和纤维连接蛋白表达降低。同时,GW501516组中Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白和Ⅰ型胶原的mRNA表达均明显下降,和其他各组相比有统计学差异。结论:PPARδ激动剂在角膜组织创伤愈合中有抗纤维化作用,它能抑制基质细胞的激活和增殖,降低基质细胞数量,缓解基质细胞向肌成纤维细胞的转化,减少细胞外基质合成。从而在基质重塑期改善角膜透明度。但PPARδ激动剂延迟角膜上皮愈合并促进角膜新生血管形成,因而需谨慎选择治疗对象。