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目的:建立高脂血症大鼠模型,以自噬为切入点,探讨化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏脂质损伤的干预作用及分子机制。材料与方法:将30只SD雄性大鼠,随机分为空白对照组、化瘀祛痰组、高脂血症组,每组10只。空白对照组给普通饲料,高脂血症组、化瘀祛痰组给高脂饲料,自由饮水,造模60天。化瘀祛痰组给予化瘀祛痰方煎剂10 ml/(kg·d),1次/日,灌胃30天。空白对照组、高脂血症组每天同一时间给予等体积的磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)灌胃。喂养90天后,生化分析仪检测大鼠血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、HE染色观察肝脏组织形态学变化、油红O染色观察肝脏脂质沉积情况。分离肝脏组织,PCR array技术检测大鼠肝脏m TOR信号通路相关基因表达,实时荧光定量RT-PCR进行验证,Western blot法检测大鼠肝脏组织AMPK调控自噬相关蛋白表达。结果:1.化瘀祛痰方对高脂血症大鼠血脂水平的影响实验结果显示:与空白对照组相比,高脂血症组血清TC、LDL-C水平显著性升高,HDL-C水平显著性降低(P<0.01),TG水平出现升高,但无统计学意义;与高脂血症组相比,化瘀祛痰组大鼠血清中TC、LDL-C水平显著性降低(P<0.01),HDL-C水平显著性升高(P<0.05),TG水平有所降低,但无统计学意义。2.化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏组织形态学变化与脂质损伤的影响HE染色显示:空白对照组肝细胞系正常,肝细胞形态正常,细胞核呈圆形,大,中央,细胞质中无脂质积累,小叶内无炎症细胞浸润;高脂血症组肝脏脂肪变性明显,肝细胞肿胀圆形,细胞质疏松,内含大的脂肪滴,有些细胞可以看到细胞核被挤入细胞膜,在细胞质中可以看到圆形的脂肪空泡和不同大小的炎症细胞;化瘀祛痰组肝脂肪变性程度降低,脂质空泡数减少,肝细胞体积减少。油红O染色显示:在高脂血症组中,肝细胞内出现油红着色,脂滴增多,呈现弥漫性;在化瘀祛痰组中,肝细胞脂滴数目显著减少。3.化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏m TOR信号通路相关基因表达的影响化瘀祛痰组与高脂血症组以及高脂血症组与空白对照组之间同时发生改变的基因有7个,根据fold change值大于2为上调基因,小于0.5为下调基因,差异性基因分别为Akt1、Bcl2、Igf1、Mapk14、Mapk8、m TOR、Becn1。结果显示:与空白对照组相比,高脂血症组Akt1、Bcl2、Igf1、Mapk14、Mapk8基因表达水平均上升,m TOR、Becn1基因表达水平下降;与高脂血症组相比,化瘀祛痰组Akt1、Bcl2、Igf1、Mapk14、Mapk8基因表达水平均下调,m TOR、Becn1基因表达水平上调。4.实时荧光定量RT-PCR法验证各组大鼠肝脏差异性基因表达对自噬及m TOR相关关键基因进行验证,包括Akt、Bcl2、m TOR、Beclin1(Becn1)。结果显示:与空白对照组相比,高脂血症组Akt和Bcl2 m RNA水平显著升高,m TOR和Beclin1 m RNA水平显著下调(P<0.01,P<0.05),与高脂血症组相比,化瘀祛痰组Akt和Bcl2 m RNA水平显著下调,m TOR、Beclin1 m RNA水平显著上调(P<0.01,P<0.05)。5.化瘀祛痰方对高脂血症大鼠肝脏AMPK信号通路介导自噬关键蛋白表达的影响Western blot法检测各组大鼠肝脏LC3A/B、p-m TOR、m TOR、p-AMPK、AMPK、ULK1蛋白的表达水平,结果显示:与空白对照组相比,高脂血症组LC3A/B、p-AMPK和ULK1蛋白表达水平显著降低(P<0.05,P<0.01),p-m TOR蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与高脂血症组相比,化瘀祛痰组LC3A/B、p-AMPK和ULK1蛋白表达水平显著升高(P<0.05),p-m TOR蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:1.化瘀祛痰方可纠正高脂血症大鼠血脂异常、改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤;2.化瘀祛痰方可能通过调控自噬相关基因及AMPK信号通路影响自噬改善高脂血症大鼠肝脏脂质损伤。