钙离子结合蛋白S100A4的原核表达纯化以及S100A6单克隆抗体的制备

来源 :上海交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wocaonima3344521
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
肝脏是人体最大的消化器官,主要负责维持新陈代谢的正常进行。由于肝脏参与食物消化这一特殊功能,使其极易发生病变,引起包括急性肝衰和肝脏纤维化等发病率和死亡率都较高的疾病的发生,从而引起人们的重视。通过CCl4诱导的小鼠急慢性肝损伤模型和基因芯片等技术手段,我们深入探讨了肝脏损伤修复的原理和机制,从而获得治疗肝损伤的全新思路和药物靶点。其中S100家族随着肝脏损伤修复过程呈现的规律性的表达变化,使其成为我们的重点研究对象。本论文以S100家族为切入点,主要包括两部分的研究内容:重组人S100A4的原核表达纯化及活性测定和S100A6单克隆抗体的制备。S100A4是S100蛋白家族的成员,在细胞的增殖,分化,损伤修复以及肿瘤细胞转移等方面发挥重要的调控作用。本研究将S100A4全长基因构建到pET28a原核表达载体上,利用大肠杆菌表达系统表达和纯化出高纯度的重组人S100A4。通过试验证明,重组人S100A4蛋白在体外可以有效的增强黑色素瘤细胞A375-S2的增殖。重组人S100A4原核表达与纯化方法的建立将促进其结构和生物学功能研究,并且对于S100蛋白家族其他蛋白的表达与纯化具有重要的参考意义。并且可用于后期对肝脏纤维化模型的药效和药理研究。为了制备抗人S100A6的单克隆抗体,利用原核表达纯化后所得纯度>97%的hS100A6为抗原,与弗氏佐剂相结合免疫Balb/c小鼠。利用杂交瘤技术,处死免疫小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,利用HAT选择性培养基筛选杂交瘤。采用Elisa检测,并用有限稀释法筛选出分泌特异抗人S100A6抗体的杂交瘤细胞株。腹腔注射同种小鼠诱导腹水产生,并应用Protein G亲和层析法进行抗体纯化。采用单克隆抗体可变区VH和VL基因组测序,为抗体可变区分区;通过Elisa、WesternBlot鉴定该单克隆抗体。结果获得2株可稳定分泌小鼠抗人S100A6的单克隆抗体,分别命名为5-1G,8-6G。Elisa和Western Blot分析表明该2株单抗均能特异性识别hS100A6。最终成功制备了2株鼠抗人S100A6蛋白的单克隆抗体,为建立S100A6蛋白检测奠定了基础。并且可用于后续S100A6中和抗体调节肝脏纤维化的药理学研究。
其他文献
本研究利用668 只考力代母羊的产羔数、活羔数、受精力、妊娠维持和多胎性五个繁殖性状的1261 个记录和1188 只考力代羔羊的初生重记录。采用以下步骤进行分析: ①利用SPSS
高寒半干旱区美国椒样薄荷越冬试验初报左庆华,尹江,郝志君,乔海明(张家口市坝上农科所)美国椒样薄荷(MenthaPiperitL.)属长日照多年生植物,全世界主要产区集中在美国的密执安纳、威斯康星、印第安纳
目前,我国大多数煤矿都采用磁石电话作为井下通讯工具(有少数矿采用共电电话)。由于这种通讯方式占用线路多,通讯电缆芯线的数目限制了井下电话的台数,因而井下通讯网很不完
繁殖性状是禽类重要的经济性状,直接影响养禽业的生产效率和经济效益。我国鸭品种资源丰富,近年来养鸭业高速发展,但目前我国养鸭业生产中存在主导品种不突出,个别地方鸭品种性成
  本研究首先将禽流感的NA基因在T4噬菌体衣壳表面展示,获得重组的噬菌体T4-NA,然后与已获得的含有HA1基因的重组噬菌体T4-HA1一起进行免疫效果的研究。  1、首先采用RT-PC
激光全息干涉法是本世纪六十年代兴起的新技术,它在生产和科研的许多领域中得到应用。在实验应力分析中,全息干涉法也成为一种很有发展前途的手段。我们就全息干涉法在岩石
试验采用4×4拉丁方设计,以8头始重为45~70kg的杜长二元杂种阉猪为试验动物,运用平衡试验法,研究植酸酶对高油玉米、棉粕和玉米蛋白粉三种植物性饲料中磷利用率的影响.试验分
摘要:介绍电视发射天线的特点和电磁辐射环境影响特征,选取典型的电视塔开展理论估算,分析电视发射塔电视信号发射对周围环境产生的电磁辐射影响范围和程度。结果表明:公众逗留位置的电磁辐射水平可满足国家相关标准的规定。  关键词:电视发射塔  电磁辐射 环境影响  中图分类号:x83  文献标识码:A  文章编号:1007.3973(2011)010.113.02
中国的美食家对厨师所烹饪的菜肴,要从色、香、味、形四个方面进行考核。读者对编辑编出的报纸版面,似乎也可借用这色、香、味、形来考核。报纸版面是否色、香、味、形俱全,
在正四丁基八钼酸(β型)铵和微量乙二胺的存在下,丙酮分子发生羟醛缩合形成了4甲基4羟基2戊酮,并与八钼酸根和正四丁基铵阳离子组成了标题化合物。X射线单晶结构分析表明该晶
期刊