中长碳链甘油三酯结构对秀丽隐杆线虫寿命的影响

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中长碳链甘油三酯主要有物理混合型(MCT/LCT)和结构脂型(STG),二者总脂肪酸组成相同,脂肪酸在甘油三酯的位置分布不同,且在消化吸收、脂质代谢和免疫炎症等方面存在差异。寿命是衡量健康的综合指标,研究表明生物体摄食的脂肪酸会影响其寿命,但脂肪酸在甘油三酯的位置分布对寿命的影响鲜有报道。秀丽隐杆线虫是研究寿命机制的理想模型。然而,秀丽隐杆线虫水溶性的培养环境使得其在评价脂质营养方面受到限制。因此,本论文利用蛋白乳液包埋技术向秀丽隐杆线虫递送脂质,评价中长碳链甘油三酯结构对秀丽隐杆线虫寿命的影响。主要内容如下:首先,基于蛋白乳液包埋技术建立了秀丽隐杆线虫脂质递送方法。采用高压均质的方法制备平均粒径200-400 nm的蛋白乳液。利用荧光标记方法证明秀丽隐杆线虫可以成功摄入蛋白乳液。检测摄食蛋白乳液后秀丽隐杆线虫的脂肪酸组成来评价乳液粒径和培养基中油脂浓度对摄入量的影响,结果表明当乳液粒径在200-400 nm范围时,乳液粒径越小越有利于油脂的递送;当油脂浓度在0.01-10 mmol/L范围时,油脂浓度与油脂的递送量呈正相关。此外,本文还利用共轭亚油酸甘油三酯进行了方法验证,结果显示蛋白乳液递送的共轭亚油酸甘油三酯被秀丽隐杆线虫成功代谢,减少了体内脂肪的积累。其次,利用中碳链甘油三酯和三油酸甘油三酯酶法酯交换合成STG。对酶法酯交换的加酶量、反应温度和反应时间进行优化,确定最优反应条件为加酶量6%、反应温度90°C和反应时间6 h,产率可以达到70%。检测STG与MCT/LCT的理化指标,结果表明相对于MCT/LCT,STG的氧化稳定性提高了38.41%,熔点降低了16.44%,甘油三酯的种类增加了24种,sn-2位中碳链脂肪酸降低了7.71%,长碳链脂肪酸增加了7.71%,饱和和非饱和脂肪酸的比例没有改变。最后,研究MCT/LCT和STG对秀丽隐杆线虫寿命的影响。结果表明MCT/LCT实验组较STG实验组秀丽隐杆线虫的寿命减小了20.19%,脂肪含量增加了15.29%,活性氧增加了28.17%,丙二醛增加了55.99%,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性分别降低了29.84%和36.28%。谷胱甘肽过氧化物酶活性没有显著变化。对秀丽隐杆线虫寿命相关的关键基因mRNA转录水平的变化进行分析,结果表明MCT/LCT实验组较STG实验组秀丽隐杆线虫体内的编码AMPKα亚基的基因aak-2的转录水平下调了33.33%,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的相关基因sod-3和cat-1的转录水平分别降低了14.08%和43.16%,而谷胱甘肽过氧化物酶的相关基因gpx-1、热量限制通路的关键基因sir-1.2、胰岛素及类胰岛素信号通路关键基因daf-2和daf-16的转录水平没有发生显著变化。进一步利用基因缺陷型秀丽隐杆线虫对上述基因进行了验证,结果表明中长碳链甘油三酯主要通过改变编码aak-2基因的转录水平影响秀丽隐杆线虫的寿命。
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