【摘 要】
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该研究构建了胎肾和正常成人肾组织的SSH消减cDNA文库,并将文库中的克隆制备成基因芯片,用来对胎肾和成人肾脏中的差异表达基因进行筛选,并尝试利用RACE方法克隆未知cDNA的全
【出 处】
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中国人民解放军军事医学科学院 解放军军事医学科学院
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该研究构建了胎肾和正常成人肾组织的SSH消减cDNA文库,并将文库中的克隆制备成基因芯片,用来对胎肾和成人肾脏中的差异表达基因进行筛选,并尝试利用RACE方法克隆未知cDNA的全长.该研究在从人12~18周龄胎肾和正常成人肾组织中分离mRNA后,经反转录合成双链cDNA并指定胎肾组织cDNA为实验方,正常成人肾组织cDNA为驱动方.将实验方cDNA分成两份后,分别接上各自不同的接头并将它们分别和变性的驱动方杂交.杂交后两将两份样品混合继续与变性的驱动方杂交.经PCR扩增后,将扩增产物克隆至T载体,电转化大肠杆菌,获得SSH消减cDNA文库.经检测所构建的文库滴度高达1.06×10<10>/ml,阳性率为69.8﹪ ,克隆片段长度主要集中于400bp~600bp之间,满足进一步研究的要求.
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